应用巢式PCR对猪胚胎微量细胞性别的鉴定方法

刘龑; 徐蕴博; 张琦; 徐倩倩; 尹智; 刘忠华; 翁晓刚

doi:10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2025.04.005

东北农业大学学报 ›› 2025, Vol. 56 ›› Issue (04) : 47 -55. DOI: 10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2025.04.005

应用巢式PCR对猪胚胎微量细胞性别的鉴定方法

刘龑, 徐蕴博, 张琦, 徐倩倩, 尹智, 刘忠华, 翁晓刚

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摘要

为建立1种准确可靠的猪胚胎微量细胞性别的鉴定方法，将不同数量细胞样本进行DNA提取纯化后进行PCR扩增，结果表明：当使用纯化的DNA模板进行1轮PCR扩增时，SRY/ZFX引物可在10个细胞中有效扩增，而AMEL和SUSY/SUS12S引物仅在50个细胞以上有效。与纯化DNA模板相比，使用细胞裂解液进行PCR扩增的效果更优，但单次PCR中SUSY/SUS12S和AMEL引物在1或10个细胞样本中未检测到特异性条带。通过设计巢式PCR引物，成功在单细胞中扩增目标基因，特别是AMEL引物效果最佳，并通过Y染色体DNA-FISH检测验证PCR结果准确性。此外，通过在体外受精囊胚中测试建立的巢式PCR方法，表现出良好特异性。