牛凝乳酶在黑曲霉中的高效表达

刘佳悦, 刘天奇, 张会, 樊俊博, 马境辰, 李杰

doi:10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2025.05.005

东北农业大学学报 ›› 2025, Vol. 56 ›› Issue (05) : 45 -53+73. DOI: 10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2025.05.005

牛凝乳酶在黑曲霉中的高效表达

刘佳悦, 刘天奇, 张会, 樊俊博, 马境辰, 李杰

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摘要

为探究融合蛋白和密码子优化策略对凝乳酶表达的影响，试验采用对重组菌株进行蛋白、酶活力检测方法，总结出提高蛋白质产量的有效策略。结果表明：以黑曲霉高分泌蛋白GlaA、XynB、AmyA、EglA、FaeA、Amy15作为载体蛋白，重组牛凝乳酶活力分别达到5 140.75、3 725.94、2 088.97、1 202.41、444.19、307.69 SU·mL^-1。使用密码子优化策略，融合Amy15、XynB、GlaA载体蛋白的重组牛凝乳酶活力分别为514.51、4151.44、5 072.21 SU·mL^-1。分析重组牛凝乳酶酶学性质，最适反应温度为70℃、最适pH为6.0，添加Fe³⁺可显著提高酶活力。试验构建出高效表达凝乳酶的黑曲霉重组菌株，为异源低表达蛋白在黑曲霉中的高效表达提供新思路。