抗小鹅瘟病毒截短型 IgY 抗体表达及其中和活性检测

摘要

为获得针对小鹅瘟(GP)的本动物源治疗性工程抗体,将试验室制备的 pET27b-tHC10、pET27b-tHC11、pET27b-L3 种表达载体,经大肠杆菌表达系统包涵体表达,获得 1 种轻链蛋白和 2 种截短型重链蛋白,将截短型重链和轻链按照 3:2 质量比稀释复性,获得截短型抗体 IgY(ΔFc)-10 和 IgY(ΔFc)-11。蛋白质印迹法和 ELISA 结果表明：2 种 IgY(ΔFc)均可特异性结合小鹅瘟病毒(GPV)VP2 蛋白和完整 GPV 颗粒。细胞水平阻断试验结果表明：IgY(ΔFc)-10 和 IgY(ΔFc)-11 最低有效抑制质量浓度分别为 10、5 mg·L^-1。在鹅胚攻毒保护试验中,以 100 ELD₅₀(每 0.2 mL 的 EID₅₀ 为 10^-4.625)的 GPV 攻击时,100 μg 的 IgY(ΔFc)-10 和 IgY(ΔFc)-11 对鹅胚的攻毒保护率分别为 40%、60%,且存活胚胎的生长发育状态与生理盐水对照组无差异。此外,通过建立基于实时荧光定量 PCR 的 GPV 中和活性评价体系,确定 C_t=22.12 为细胞病变临界值,为抗体中和活性评估提供新方法。可知,截短型 IgY 抗体可有效阻断 GPV 感染,为小鹅瘟治疗性抗体开发奠定基础。

关键词

鹅细小病毒 / 截短型 IgY 抗体 / 治疗性抗体 / 中和活性试验 / 攻毒保护性试验

参考文献

[1] 李丹, 陈亮, 冯万宇, 等. 小鹅瘟的诊断与防治[J]. 家禽科学, 2024, 46(1): 61-63.

[2] 徐江腾, 郏佳伟, 郭钰贺, 等. 一起小鹅瘟病例的诊治报告[J]. 畜牧业环境, 2024(24): 54-56.

[3] 鄢长庆, 巴依尔塔, 陈红, 等. 小鹅瘟的诊断和防控措施[J]. 畜牧兽医科技信息, 2024(2): 194-197.

[4] 李军文 . 雏鹅常见病毒感染的防控[J]. 家禽科学, 2025, 47(5): 99-102.

[5] 王倩, 鞠环宇, 荆志强, 等. 鹅细小病毒 PCR 检测方法的建立及初步应用[J]. 东北农业大学学报, 2012, 43(3): 58-62.

[6] 郭静 . 小鹅瘟的流行病学、临床特征、药物治疗和免疫预防[J]. 现代畜牧科技, 2021(1): 147-148.

[7] 黄爱英 . 小鹅瘟的防治[J]. 畜禽业, 2023, 34(7): 83-85.

[8] 李军伟, 余秋颖, 张艳芝, 等. 猪圆环病毒 2 型灭活疫苗的植物源免疫增强剂筛选[J]. 河南农业大学学报, 2025, 59(2): 243-254.

[9] 李建鑫 . 小鹅瘟灭活疫苗的制备及其免疫效果试验[J]. 河南畜牧兽医(综合版), 2009, 30(9): 6-7, 24.

[10] Kisary J, Derzsy D, Mészáros J. Attenuation of the goose parvovirus strain B. laboratory and field trials of the attenuated mutant for vaccination against Derzsy's disease[J]. Avian Pathology, 1978, 7(3): 397-406.

[11] 胡瑞鸿, 丛秋实, 李艳飞 . 小鹅瘟卵黄抗体酸化水脱脂工艺优化[J]. 东北农业大学学报, 2018, 49(11): 18-25.

[12] 李国勤, 陈黎, 田勇, 等. 鸡与鸭重要免疫相关基因结构与功能差异及其禽流感抗性关联分析[J]. 中国兽医学报, 2017, 37(6): 1186-1192.

[13] 王旭婷 . 卵黄免疫球蛋白(IgY)制备条件优化与应用研究[D]. 无锡: 江南大学, 2021.

[14] Humphrey B D, Calvert C C, Klasing K C. The ratio of full length IgY to truncated IgY in immune complexes affects macrophage phagocytosis and the acute phase response of mallard ducks (Anas platyrhynchos) [J]. Developmental and Comparative Immunology, 2004, 28(7/8): 665-672.

[15] Grey H M. Duck immunoglobulins. I. Structural studies on a 5.7S and 7.8S gamma—globulin[J]. Journal of Immunology, 1967, 98(4): 811-819.

[16] Magor K E. Immunoglobulin genetics and antibody responses to influenza in ducks[J]. Developmental and Comparative Immunology, 2011, 35(9): 1008-1017.

[17] 夏霖亚, 田兴雨, 范红结, 等. 猪 C 反应蛋白原核表达及单克隆抗体制备[J]. 南京农业大学学报, 2025, 48(6): 1343-1350.

[18] 朱文姣, 常琛, 朱玉虎, 等. 猪流行性腹泻病毒 coe 基因的克隆表达及卵黄抗体的制备[J]. 河南农业大学学报, 2018, 52(4): 560-565.

[19] 贾佳, 王骊丽, 高栋, 等. 高效疏水相互作用色谱法复性与同时纯化重组人 Flt3 配体的包涵体蛋白质[J]. 色谱, 2010, 28(6): 535-540.

[20] 薛姣雄, 赵婷芳, 张倩, 等. 犬冠状病毒 S1 蛋白特异性小分子抗体 Fab 的制备[J]. 浙江农业学报, 2023, 35(11): 2568-2583.

[21] 刘浩, 杨燚, 赵丽霞, 等. 1 株小鹅瘟病毒的分离与鉴定[J]. 养禽与禽病防治, 2023(7): 31-35.

[22] 张遥遥, 张小莺, 李新平 . 猪圆环病毒 2 型 Cap 基因的原核表达及 IgY 多抗的制备[J]. 中国兽医科学, 2017, 47(6): 727-732.

[23] 蒋运博 . 鹅源抗小鹅瘟高免血清 F(ab')2 片段的制备及初步应用[D]. 长春: 吉林农业大学, 2012.

[24] Chiou V Y N. The development of IgY(ΔFc) antibody based neurotoxin antivenoms and the study on their neutralization efficacies[J]. Clinical Toxicology, 2008, 46(6): 539-544.

[25] Zhang Q, Lin H, Sui J, et al. Effects of Fab' fragments of specific egg yolk antibody (IgY—Fab') against Shewanella putrefaciens on the preservation of refrigerated turbot [J]. Journal of the Science of Food and Agriculture, 2015, 95(1): 136-140.

[26] Zhang M, Hua L, Xie T Y, et al. Post—translational cleavage generates truncated IgY forms in the snake Elaphe taeniura [J]. Zoological Research, 2025, 46(2): 277-284.

基金资助

黑龙江省重点研发计划(创新基地)项目(JD24B009)