兔成纤维细胞Tet-On 3G系统诱导SpCas9的表达

张成达; 张彩艳; 赵多维; 杨素杰; 郭晓晨; 赵祥杰; 宋军

doi:10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2026.02.009

东北农业大学学报 ›› 2026, Vol. 57 ›› Issue (02) : 1 -12. DOI: 10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2026.02.009

兔成纤维细胞Tet-On 3G系统诱导SpCas9的表达

张成达, 张彩艳, 赵多维, 杨素杰, 郭晓晨, 赵祥杰, 宋军

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摘要

CRISPR/Cas9系统中SpCas9的持续表达易导致脱靶效应与细胞毒性，这一问题限制了其在体内基因编辑中的应用。为克服该局限，成功在兔成纤维细胞中建立了Tet-On 3G诱导型CRISPR/Cas9基因编辑系统。通过设计靶向兔H11安全港基因座的特异性sgRNA，并利用CRISPR/Cas9介导的同源重组修复，将Tre3G-SpCas9-P2A-EGFP-pA表达框精确整合至H11位点。结合PiggyBac转座子实现rtTA稳定表达，经多西环素诱导后，可有效启动SpCas9及EGFP报告基因表达，并显著降低背景泄露。研究结果在兔成纤维细胞中验证了Tet-On 3G系统的可行性，为构建可诱导基因编辑的兔模型提供技术基础。