南极假丝酵母脂肪酶B与CBM的融合表达及固定化

邵志伟; 马佳欣; 张晓慧; 张会; 樊俊博; 库嘉英; 李杰

doi:10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2026.03.004

东北农业大学学报 ›› 2026, Vol. 57 ›› Issue (3) : 39 -49. DOI: 10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2026.03.004

南极假丝酵母脂肪酶B与CBM的融合表达及固定化

邵志伟, 马佳欣, 张晓慧, 张会, 樊俊博, 库嘉英, 李杰

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摘要

将南极假丝酵母脂肪酶B（Candida antarctica lipase B,CALB）基因CALB分别与草酸青霉（Penicillium oxalicum）来源的碳水化合物结合模块CBM_cbh3和黑曲霉（Aspergillus niger）来源的碳水化合物结合模块CBM_EglA6融合构建表达载体PSZHG6R-XynB-CBM_cbh3-CALB和PSZHG6R-XynB-CALB-CBM_EglA6，同时转入黑曲霉TH-2（ΔasaA::pyrG）、TH-2（ΔasaA::scerv29ΔprtT::pyrG）中表达。将得到的4株黑曲霉重组菌株分别命名为PH、PA、AH、AA。利用CBM对微晶纤维素（MCC）的吸附特性，将PH、PA表达的融合蛋白固定在微晶纤维素上，并研究固定化酶的制备条件、结合量、酶学性质等。通过比较融合表达的游离酶及固定化酶的酶学性质发现，酶学性质无变化。采用0.1 g·mL^-1微晶纤维素，在10℃、p H=5.0、NaCl浓度为400 mmol·L^-1条件下固定60 min，融合蛋白CBM_cbh3-CALB和CALB-CBM_EglA6的结合量分别为4.93和4.58 mg·g^-1。CALB与CBM融合表达及在微晶纤维素上的固定，为酶的异源表达及固定提供新策略。