抗菌肽-裂解酶融合抗铜绿假单胞菌蛋白的可溶表达与活性评价

摘要

目的 通过与促溶蛋白融合表达，分离、纯化获得抗菌融合蛋白，并初步评价其抗菌活性。方法 将绵羊骨髓细胞抗菌肽SMAP29的N端与源自噬菌体JD010裂解酶LysPA26的C端融合设计新的抗菌蛋白(AL)。通过同源重组构建pCold-His-TF-AL表达质粒。通过Ni-亲和层析和阴离子交换层析分离纯化AL,采用平板计数法初步评价AL的抗铜绿假单胞菌活性。结果 在E.coli BL21(DE3)中，质粒pCold-His-TF-AL能明显表达出抗菌蛋白AL,并且90%以上的AL为可溶形式分布于E.coli破菌液的上清液中。可分离纯化得到纯度超95%的AL。0.05 mg·mL~(-1) AL在30 min内可将铜绿假单胞菌PAO1菌量降低5.55个对数单位，具较高的抗菌活性。结论 通过采用Trigger Factor标签融合表达和冷休克诱导方法可实现AL的高效可溶表达，纯化的AL对铜绿假单胞菌具有明显的抗菌活性。

关键词

绵羊骨髓细胞抗菌肽 / SMAP29 / 裂解酶 / LysPA26 / 重组蛋白 / TF标签 / 可溶表达 / 铜绿假单胞菌