重组白蛋白结合肽融合抗EGFR纳米抗体的原核可溶表达、纯化与表征

摘要

目的 研究长效纳米抗体7D12与白蛋白结合肽融合蛋白（7D12-ABD）在原核体系内的可溶表达水平，并初步评价其活性。方法 通过与SUMO促溶标签融合表达，构建白蛋白结合肽融合表皮生长因子受体（EGFR）纳米抗体7D12重组表达载体（pET-32a-His-SUMO-7D12-ABD）,用镍亲和层析、疏水层析分离纯化7D12-ABD,采用基质辅助激光解吸飞行时间质谱、圆二色光谱和荧光光谱表征其结构，并通过与人血清白蛋白（HSA）和EGFR体外结合实验评价其活性。结果 7D12-ABD约80%以可溶形式存在于破菌上清液中，获得纯度>95%的融合蛋白。7D12-ABD的分子量和结构折叠正确，能与HSA按1:1结合，与EGFR结合的半数最大效应浓度为5.533 ng·mL^-1。结论 通过SUMO标签可成功实现7D12-ABD在原核系统胞内的可溶表达；7D12-ABD在体外能与HSA和EGFR高效结合。

关键词

纳米抗体 / 表皮生长因子受体 / 白蛋白结合肽 / 可溶表达 / 层析纯化 / 重组蛋白