抗菌肽Cecropin A的可溶表达及快速纯化工艺研究

摘要

目的 通过促溶标签和His tag实现抗菌肽Cecropin A在原核系统中的可溶表达和分离纯化，并评价其对铜绿假单胞菌的抗菌活性。方法 将小分子泛素样修饰蛋白标签SUMO以及His tag与Cecropin A融合，构建pET30a（+）-His-SUMO-cecropin A表达载体，通过一步镍亲和层析捕获His-SUMO-cecropin A,经Ulp1酶切后再通过镍亲和层析流穿得到无氨基酸残留的Cecropin A,采用细菌生长浊度法评价Cecropin A对铜绿假单胞菌的活性。结果 在BL21（DE3）和Transetta（DE3）感受态中均能表达His-SUMO-cecropin A蛋白，与SUMO标签融合成促进了Cecropin A在上清中的可溶表达。经两步镍亲和层析，可纯化得到0.447 mg·mL^-1的Cecropin A,3μmol·L^-1的Cecropin A与铜绿假单胞菌作用1 h后的ΔOD₆₀₀%为66.80%,Cecropin A对铜绿假单胞菌有抗菌活性。结论 通过与His-SUMO标签融合，可提高抗菌肽Cecropin A的可溶性，有利于蛋白纯化，纯化的Cecropin A对铜绿假单胞菌有较好的抗菌活性。

关键词

天蚕素抗菌肽 / Cecropin A / 可溶表达 / 促溶标签 / SUMO / His tag / 融合蛋白 / 铜绿假单胞菌