重组牛肠激酶轻链在大肠杆菌中的可溶表达、纯化及表征

摘要

目的 通过与促溶蛋白融合表达，分离、纯化得到以可溶形式表达且具有活性的重组牛肠激酶轻链蛋白，并对其进行结构表征。方法 将重组牛肠激酶轻链基因与实验室自主设计的双SUMO蛋白串联基因序列融合表达，通过离子交换层析和镍亲和层析的纯化方式分离纯化重组蛋白，通过圆二色光谱、荧光发射光谱的手段确证其结构准确性，并通过BAEE活性测定法证实重组牛肠激酶轻链蛋白能够识别并切割Val-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列。结果 融合双SUMO表达的重组牛肠激酶轻链蛋白主要以可溶形式表达，通过离子交换层析和镍亲和层析纯化可得到纯度约95%的重组蛋白，经结构表征，确定重组牛肠激酶轻链蛋白结构正确，具有识别切割Val-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列的活性。结论 通过融合双SUMO促溶蛋白可在大肠杆菌原核表达体系中实现重组牛肠激酶轻链的可溶表达，纯化得到的重组牛肠激酶轻链结构正确且具有识别切割Val-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列的活性。

关键词

肠激酶 / 大肠杆菌表达体系 / 双SUMO促溶蛋白 / 可溶性表达 / 层析纯化 / 酶活性