橙色红曲菌中Rab1与CtnE蛋白的亚细胞定位

摘要

红曲菌(Monascus)是我国传统的发酵菌株，在发酵过程中会产生一种具有肾毒性的真菌毒素——桔霉素(Citrinin, CIT)。桔霉素的存在极大地限制了红曲制品的应用与发展。明确红曲菌合成CIT的机制，对于开发抑制CIT合成的方法具有十分重要的意义。小G蛋白Rab1可以介导调控丝状真菌中蛋白的转运，ctnE基因编码红曲菌AS3.4384中CIT合成基因簇中的脱氢酶。然而，目前尚不清楚Rab1蛋白是否参与了CtnE蛋白的转运。通过农杆菌介导转化的方法构建了AS3.4384::Rab1-GFP(绿色荧光蛋白，Green Fluorescent Protein)和AS3.4384::Rab1-GFP::ctnE-mCherry(红色荧光蛋白，monomeric cherry red fluorescent protein)两种红曲菌株，并通过荧光共定位确定了Rab1蛋白和CtnE蛋白在菌体中的分布情况。结果表明，CtnE-mCherry蛋白大多聚集于红曲菌丝体的顶端以及分生孢子中，并在菌丝体内呈均匀弥散状分布。Rab1蛋白和CtnE蛋白在红曲菌体内的分布位点基本一致，表明CIT的合成与囊泡转运密切相关。通过Rab1蛋白与CtnE蛋白的荧光共定位情况进一步解析了CIT合成位点。

关键词

橙色红曲菌 / 桔霉素 / 双荧光共定位系统 / 农杆菌介导转化法