赭曲霉毒素A结构修饰物监测免疫亲和柱容量

摘要

为探索免疫亲和柱串联高效液相色谱（immunoaffinity column-high performance liquid chromatography,IAC-HPLC）监测IAC柱容量的方法，本研究利用赭曲霉毒素A（Ochratoxin A,OTA）与乙二胺发生缩合反应，纯化获得高纯度OTA结构修饰物（OTA-X），通过光谱、质谱对其进行了鉴定，以IAC的抗体建立了酶联免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA），测得OTA与OTA-X在竞争抑制曲线的IC₅₀值分别为0.71和9.97 ng·mL^-1，表明OTA-X与抗体的亲和力低于OTA。以OTA-X作为IAC柱容量的示踪物，建立了IAC-HPLC方法，监测添加不同浓度的OTA-X和OTA在IAC的回收率。结果表明：在柱容量范围内，OTA的回收率大于80%，而OTA-X的回收率随着OTA的增加而降低，总结合量大于柱容量，说明OTA-X可以作为IAC柱容量的示踪物监测柱容量，且不影响OTA的检测结果，为提高OTA检测的准确度提供了新方法。

关键词

免疫亲和柱 / 柱容量 / 赭曲霉毒素A / 结构修饰物 / 高效液相色谱