丙酸蛛网菌来源单宁酶的异源表达及其酶学性质

摘要

将丙酸蛛网菌（Arachnia propionica）来源的单宁酶基因克隆到质粒pET-22b（+）中，成功实现其在大肠杆菌BL21（DE3）中的表达，经Ni-NTA镍柱分离纯化，获得纯化后的重组单宁酶Ap-Tan。测定得到重组酶Ap-Tan分子量约为65 kDa，最适pH为6，最适温度为30℃，在pH为6～10的环境下保存24 h，酶活能保留70%以上，在40℃环境下保存4.5 h，酶活能保留65%以上，热稳定性较好。1和5 mol·L^-1 Mg²⁺分别能使酶活提高约24%和53%,5 mol·L^-1 Al³⁺与Zn²⁺对酶活有抑制作用，二硫苏糖醇与β-巯基乙醇则完全抑制其酶活。另外，重组酶对单宁酸的亲和力显著高于没食子酸甲酯和没食子酸丙脂。本研究不仅实现了A. propionica来源单宁酶的表达与酶学性质表征，同时丰富了单宁酶来源，拓宽了单宁酶的应用。

关键词

单宁酶 / 异源表达 / 酶学性质