成年大鼠急性脊髓损伤后S100B调控星形胶质细胞增殖的作用研究

摘要

目的 ：研究S100钙结合蛋白B(S100 calcium-binding protein B,S100B)在成年大鼠急性脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后对星形胶质细胞增殖的调控作用。方法：将70只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组14只和脊髓损伤组56只，采用NYU撞击器建立脊髓损伤模型。大鼠脊髓损伤后采用Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评定量表评估大鼠后肢运动功能，采用蛋白质印迹法测定脊髓组织中S100B蛋白表达水平，免疫组织化学法和双重免疫荧光染色技术检测S100B在大鼠脊髓组织中的表达与定位。体外培养原代星形胶质细胞，脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导星形胶质细胞后采用蛋白质印迹法分别测定S100B蛋白表达水平；将S100B siRNA转染至原代星形胶质细胞中，采用CCK8法测定细胞增殖能力，流式细胞术测定细胞周期。结果：BBB运动功能评分显示，大鼠脊髓损伤后6 h均丧失后肢运动功能，但从损伤后12 h开始运动功能自发性恢复。蛋白质印迹结果显示，S100B蛋白表达水平在脊髓损伤后6 h开始升高，于第3天达到峰值。免疫组织化学结果显示，S100B蛋白主要表达于脊髓白质，仅少量表达于灰质。脊髓损伤后3天白质中S100B表达明显增加。双重免疫荧光染色结果显示，S100B在星形胶质细胞和小胶质细胞中表达，且与增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）共定位。LPS诱导原代星形胶质细胞后S100B蛋白表达逐渐升高，敲低S100B蛋白表达后，原代星形胶质细胞增殖能力显著低于Control组和NC siRNA组。流式细胞术检测结果显示，与Control组和NC siRNA组比较，S100B siRNA组S期细胞比例降低，G0/G1期细胞比例升高。结论：大鼠脊髓损伤后白质中S100B蛋白表达显著上调，从而促进星形胶质细胞增殖，并通过调控细胞周期参与SCI后的病理生理过程，为脊髓损伤的临床干预提供了新的理论基础。

关键词

脊髓损伤 / S100钙结合蛋白B / 星形胶质细胞 / 增殖