姜黄素通过上调miR-34a抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的恶性生物学行为

摘要

目的 探讨姜黄素对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞恶性生物行为的影响及其可能作用机制。方法 CCK8法检测姜黄素(0、6.25、12.5、25、50和100μmol·L^-1)作用下细胞活力并筛选出后续姜黄素处理浓度(0、6.25、12.5、25μmol·L^-1),流式细胞法、划痕实验、Transwell实验和Western blot分别检测细胞凋亡、迁移、侵袭及相关蛋白水平。使用qRT-PCR法检测SH-SY5Y细胞miR-34a表达水平，构架miR-34a低表达SH-SY5Y细胞系（miR-34a inhibitor组）及其阴性对照（NC组）、对照组（Control组）,三组细胞系均给予姜黄素(25μmol·L^-1)处理分别记为黄素+miR-34a inhibitor组、姜黄素+NC组、姜黄素组，另设置空白对照组，采用上述相同方法检测各组细胞凋亡、迁移、侵袭及相关蛋白水平和p-p65、p-IκBα蛋白水平。结果 当姜黄素干预浓度达到12.5μmol·L^-1时，SH-SY5Y细胞存活率显著低于无姜黄素处理的细胞（P<0.05）;姜黄素(12.5、25μmol·L^-1)组细胞凋亡率、Cleaved cas3/cas3、Cleaved cas9/cas9、E-cadherin蛋白表达和miR-34a表达水平均显著高于姜黄素(0μmol·L^-1)组（P<0.01）,划痕细胞闭合率、侵袭细胞数目和N-cadherin、Snail蛋白表达均显著低于黄素(0μmol·L^-1)组（P<0.05）;姜黄素组细胞凋亡率和Cleaved cas3/cas3、Cleaved cas9/cas9、E-cadherin蛋白表达均显著高于空白对照组（P<0.01）,而划痕细胞闭合率、侵袭细胞数目和N-cadherin、Snail、p-p65/p65、p-IκBα/IκBα蛋白表达均显著低于空白对照组（P<0.01）;姜黄素+miR-34a inhibitor组细胞凋亡率和Cleaved cas3/cas3、Cleaved cas9/cas9、E-cadherin蛋白表达均显著低于姜黄素+NC组（P<0.01）,而划痕细胞闭合率、侵袭细胞数目和N-cadherin、Snail、p-p65/p65、p-IκBα/IκBα蛋白表达均显著高于姜黄素+NC组（P<0.01）。结论 姜黄素可以促进SH-SY5Y细胞凋亡、抑制细胞迁移和侵袭，可能与上调miR-34a表达抑制NF-κB信号通路有关。

关键词

神经母细胞瘤 / 姜黄素 / miR-34a / 细胞凋亡 / 迁移 / 侵袭