丹皮酚通过调控动脉粥样硬化中的miR-152-3p/ASPH轴抑制氧化低密度脂蛋白诱发的小鼠血管内皮细胞凋亡、炎症反应和氧化应激

摘要

目的 揭示丹皮酚通过调控miR-152-3p/ASPH轴在ox-LDL诱导的血管内皮细胞（vascular endothelial cells, VECs）进展中的作用。方法 首先，用不同浓度的氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL）(0、25、50、100μg·mL^-1)处理小鼠VECs,选取100μg·mL^-1 ox-LDL进行实验。然后，用不同浓度的丹皮酚(30、60、120μmol·L^-1)或辛伐他汀(30μmol·L^-1)处理VECs。接着，使用细胞计数试剂盒-8和流式细胞术分别用于测定细胞活力和凋亡。此外，使用酶联免疫吸附法分析了IL-1β和IL-6的水平，并使用相关试剂盒检测了活性氧、乳酸脱氢酶和丙二醛的含量。此外，通过qRT-PCR或Western blot检测miR-152-3p和天冬氨酰（天冬酰胺）β-羟化酶（aspartate-β-hydroxylase, ASPH）的表达。miR-152-3p和ASPH之间的相互作用由starBase预测，然后通过双荧光素酶报告基因实验和RNA结合蛋白免疫沉淀实验证实。结果 100μg·mL^-1 ox-LDL显著抑制VECs活力，并促进细胞凋亡、炎症反应和氧化损伤。而丹皮酚的处理以剂量依赖性的方式增加细胞活力，抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡。丹皮酚以剂量依赖性的方式降低ox-LDL诱导的IL-1β和IL-6的水平，以及以剂量依赖性的方式减弱ox-LDL对ROS、MDA和LDH含量的促进作用。另外，ox-LDL对miR-152-3p表达的抑制作用和对ASPH表达的促进作用也被丹皮酚逆转，且120μmol·L^-1丹皮酚效果最好。120μmol·L^-1丹皮酚能够上调miR-152-3p或下调ASPH,进一步促进丹皮酚对VECs生长的保护作用，miR-152-3p靶向负调控ASPH表达。结论 丹皮酚通过调节miR-152-3p/ASPH轴减弱ox-LDL对小鼠VECs生长的影响，为AS的治疗提供理论基础。

关键词

丹皮酚 / 氧化低密度脂蛋白 / miR-152-3p / 天冬氨酰(天冬酰胺)β-羟化酶 / 血管内皮细胞 / 动脉粥样硬化