黄芪多糖调控AMPK-mTORC1通路对牙周膜成纤维细胞增殖、凋亡、自噬的影响

摘要

目的 探究黄芪多糖（Astragalus polysaccharide, APS）对牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament fibroblasts, HPLF）增殖、凋亡、自噬及磷酸腺苷蛋白激酶（AMPK）/雷帕霉素靶蛋白（mTORC1）通路的影响。方法 原代培养HPLF细胞；免疫组织化学法鉴定HPLF细胞；设置对照组、0.1 mg·mL^-1组(0.1 mg·mL^-1 APS)、0.2 mg·mL^-1组(0.2 mg·mL^-1 APS)、0.4 mg·mL^-1组(0.4 mg·mL^-1 APS),细胞增殖及毒性（CCK-8）法检测各组细胞增殖抑制率；用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率；透射电子显微镜观察各组HPLF细胞自噬情况；Western blot检测各组细胞自噬、凋亡、通路相关蛋白表达情况。结果 与对照组相比，细胞增殖抑制率、细胞凋亡率在0.1 mg·mL^-1组、0.2 mg·mL^-1组显著降低，而0.4 mg·mL^-1组与0.2 mg·mL^-1组相比细胞增殖抑制率与凋亡率则明显增多。与对照组相比，0.1 mg·mL^-1和0.2 mg·mL^-1 APS显著抑制细胞自噬，而0.4 mg·mL^-1 APS则促进细胞自噬；与对照组相比，Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、bcl-2相关X蛋白（Bax）、p-AMPK/AMPK在0.1 mg·mL^-1组、0.2 mg·mL^-1组显著降低，而0.4 mg·mL^-1组与0.2 mg·mL^-1组相比表达水平则显著增加；p62、survivin、Bcl-2、p-mTORC1/mTORC1表达水平与其呈现相反趋势。结论 APS具有促进HPLF细胞增殖、抑制细胞凋亡的作用，并可能通过调节AMPK-mTORC1通路抑制细胞自噬的发生。

关键词

黄芪多糖 / 牙周膜成纤维细胞 / 磷酸腺苷蛋白激酶/雷帕霉素靶蛋白