miR-101-3p通过靶向下调GALNT1逆转乳腺癌多西他赛耐药的分子机制

摘要

目的 探讨miR-101-3p通过靶向下调GALNT1逆转乳腺癌多西他赛(docetaxel, DTX)耐药的分子机制。方法 构建MCF-7/DTX细胞株，采用qRT-PCR检测MCF-7及MCF-7/DTX细胞株及乳腺癌患者癌组织中miR-101-3p的表达水平；向MCF-7/DTX细胞转染miR-101-3p mimics、siGALNT1、miR-101-3p inhibitor并用qRT-PCR实验评估转染效率；MTT实验用于检测调控miR-101-3p及GALNT1对MCF-7/DTX细胞DTX敏感性的影响；划痕实验用于分析转染后各组细胞迁移能力的变化；Transwell实验检测调控miR-101-3p及GALNT1后MCF-7/DTX细胞的垂直侵袭能力的改变；流式凋亡实验检测各组细胞在同一浓度DTX处理下的凋亡百分比；western blot实验检测调控miR-101-3p及GALNT1对凋亡关联蛋白及上皮间充质转化标志蛋白表达量的影响。结果 MCF-7/DTX细胞和DTX患者耐药组中miR-101-3p的相对表达量呈异常降低趋势。转染miR-101-3p mimics后，与miR-NC组相比miR-101-3p mimics组DTX敏感性明显升高，迁移和侵袭能力在高水平miR-101-3p下有所降低，同时凋亡百分比显著上升凋亡蛋白表达呈相同趋势，上皮间充质转化过程受到一定抑制。MCF-7/DTX细胞中GALNT1相对表达量较MCF-7细胞明显升高，双荧光素酶实验证实了miR-101-3p与GALNT1的靶向关系并且GALNT1表达量与miR-101-3p呈负相关。回复实验进一步分析GALNT1和miR-101-3p间的关系，低水平miR-101-3p能够逆转敲低GALNT1引起的DTX高敏感性，同时一定程度恢复敲低GALNT1引起的MCF-7/DTX细胞迁移、侵袭、凋亡及EMT的改变。结论 miR-101-3p介导MCF-7/DTX细胞的DTX敏感性可能是通过靶向GALNT1完成的。

关键词

多西他赛 / miR-101-3p / GALNT1 / 乳腺癌 / 迁移 / 侵袭 / 凋亡 / 上皮间充质转化