乌梅总黄酮对MPP⁺诱导的SH-SY5Y细胞中miR-145-3p/CREB5轴的影响

摘要

目的 研究乌梅总黄酮（Fructus mume total flavone, FMF）对MPP⁺诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞基因表达的影响。方法 采用CCK-8筛选FMF及MPP⁺作用于SH-SY5Y细胞的最佳浓度与时间。收集对照组、模型组（MPP⁺诱导）和FMF组（MPP⁺诱导+FMF干预）SH-SY5Y细胞，进行全基因转录组高通量测序，并筛选差异表达的miRNAs和mRNAs。通过生信软件分析miR-145-3p潜在靶基因，并与差异表达mRNAs相交取交集。将SH-SY5Y细胞分为6组：对照组、模型组、miR-145-3p mimics组、mimics NC组、miR-145-3p inhibitor组、inhibitor NC组。qRT-PCR检测细胞miR-145-3p表达水平，Western blot检测细胞CREB5蛋白表达水平，双荧光素酶报告基因实验检测细胞荧光活性。结果 对照组与模型组间比较，存在33个差异表达miRNAs,模型组与FMF组间比较，存在16个差异表达miRNAs,取交集后，得到7个差异表达的miRNAs,其中miR-145-3p在模型组下调，在FMF组上调。经分析获到4个miR-145-3p调控的差异靶基因：CREB5、EGLN1、NTNG1和SLC22A15。与对照组比较，模型组miR-145-3p表达水平显著降低，CREB5蛋白表达水平显著升高。与NC组比较，miR-145-3p mimics组miR-145-3p表达水平显著升高，CREB5蛋白表达水平显著降低，miR-145-3p inhibitor组miR-145-3p表达水平显著降低，CREB5蛋白表达水平显著升高。双荧光素酶报告基因结果显示miR-145-3p与CREB5存在靶向调控关系。结论 miR-145-3p和CREB5均在MPP⁺诱导的SH-SY5Y细胞中差异表达，FMF可调控miR-145-3p/CREB5轴在细胞中的表达水平。

关键词

帕金森病 / 乌梅总黄酮 / 转录组测序 / miR-145-3p / CREB5

基金资助

国家自然科学基金地区科学基金项目(82060888); 广西中医药管理局基金项目(GZZC2020107); 广西中医药大学校级课题(2020MS049)