网络药理学方法联合体外实验初探金水六君煎辅助放化疗治疗恶性黑色素瘤的分子机制

摘要

目的 网络药理学方法联合体外实验初步探索金水六君煎辅助放化疗治疗恶性黑色素瘤(malignant melanoma, MM)的分子机制。方法 在TCMSP数据库中获取金水六君煎的活性成分及靶点，以“malignant melanoma”为关键词在GeneCards、TTD、OMIM数据库中获得MM相关靶点，得到金水六君煎有效成分-MM交集靶点；通过STRING数据库获取蛋白质互作(PPI)网络，利用Metascape数据库进行基因本体论分析(GO)和基因组的京都基因与基因组百科全书富集分析(KEGG)并在AutoDockTools软件中进行分子对接；MTT法检测金水六君煎含药血清对小鼠B16黑色素瘤细胞增殖活性影响；蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测金水六君煎含药血清对P38、p-P38、JNK、p-JNK、Beclin1、P62、LC3蛋白表达调控；透射电镜观察金水六君煎含药血清对B16细胞自噬影响。结果 共获得金水六君煎相关靶点248个，MM相关靶点2 147个，交集靶点149个。GO显示主要生物过程是DNA结合转录因子、激酶结合、细胞因子受体结合等；KEGG显示主要是癌症通路和MAPK信号通路，网络拓扑分析显示金水六君煎治疗MM的主要有效活性成分是槲皮素、山奈酚、柚皮素等，主要核心靶点为AKT1、TP53、JUN等；核心靶点与有效活性成分分子对接显示结合活性较好。MTT结果显示，与空白组比较，金水六君煎含药血清能有效抑制B16细胞的增殖且呈浓度依赖性。Western blotting实验表明，较空白组，中高剂量组能下调B16细胞中p-P38、p-JNK、P62蛋白表达，上调LC3Ⅱ、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达。透射电镜下显示金水六君煎含药血清能促进B16细胞中自噬体生成，减少黑素体生成。结论 金水六君煎的有效成分和药物靶点很多，其治疗MM的作用靶点与通路众多，分子机制可能是通过下调p-P38、p-JNK、P62的蛋白表达，上调Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的蛋白表达，抑制P38通路和JNK通路的激活，从而抑制B16细胞增殖；同时促进细胞凋亡，激活细胞自噬，发挥抑癌作用。

关键词

网络药理学 / 金水六君煎 / 恶性黑色素瘤 / 增殖 / 自噬 / 分子机制