miR-214-3p通过靶向ALG3调控JAK2/STAT3通路逆转乳腺癌MCF-7细胞他莫昔芬耐药

摘要

目的 研究miR-214-3p通过靶向调控ALG3/JAK2/STAT3通路逆转乳腺癌细胞他莫昔芬(Tamoxifen,TAM)耐药的具体机制。方法 构建MCF-7/TAM细胞株，qRT-PCR实验检测MCF-7及MCF-7/TAM细胞中miR-214-3p含量;向M CF-7细胞转染anti-miR-NC、anti-miR-214-3p质粒，向M CF-7/TAM细胞转染miR-NC、miR-214-3p mimics、anti-miR-214-3p及si ALG3质粒，qRT-PCR实验评估转染效率; M TT实验用于分析转染后各组细胞TAM敏感性;划痕实验评估各组细胞的迁移能力;流式凋亡实验检测同一浓度TAM诱导的各组细胞凋亡百分比; Western blot检测调控miR-214-3p后ALG3、凋亡蛋白及JAK2/STAT3通路蛋白的表达。结果 miR-214-3p在MCF-7/TAM细胞中异常低表达。随着TAM浓度增加，转染后各组细胞增殖抑制率明显升高，敲低miR-214-3p降低了MCF-7细胞的TAM敏感性，迁移能力明显提高而凋亡情况受到抑制。提高miR-214-3p水平后，MCF-7/TAM细胞增殖抑制率有所上升，迁移能力显著降低，同时凋亡百分比有一定程度增加。ALG3在MCF-7/TAM细胞中高表达。双荧光素酶实验证实了miR-214-3p和ALG3的靶向关系，并且miR-214-3p可调控ALG3的表达。向MCF-7/TAM细胞转染si ALG3抑制了JAK2/STAT3通路的激活，而共转染anti-miR-214-3p在一定程度逆转了JAK2/STAT3通路的活性。转染si ALG3明显降低了MCF-7/TAM细胞的TAM敏感性而共转染anti-miR-214-3p使M CF-7/TAM细胞的TAM敏感性得到一定程度恢复。结论 miR-214-3p可能作为抑癌因子，通过靶向ALG3调控JAK2/STAT3通路介导乳腺癌TAM耐药。

关键词

乳腺癌细胞 / 他莫昔芬 / miR-214-3p / ALG3 / JAK2/STAT3通路