PTCSC3对谷氨酸诱导SH-SY5Y神经细胞凋亡的影响

摘要

目的 探讨乳头状甲状腺癌易感性候选基因3（papillary thyroid carcinoma susceptibility candidate 3,PTCSC3）对谷氨酸（glutamicacid, Glu）诱导人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）凋亡的影响及其机制。方法 体外培养SH-SY5Y细胞，谷氨酸损伤SH-SY5Y细胞24 h,转染技术对PTCSC3进行抑制及过表达，采用Hoechst 33258染色法、流式细胞技术、AO/EB染色及四甲基偶氮唑盐比色（methylthiazolyl tetrazolium, MTT）法检测抑制或过表达PTCSC3后对各组细胞凋亡、生存的影响；实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qPCR）技术检测各组细胞中PTCSC3、CCAAT/增强子结合蛋白β（CAAT/enhancer binding protein beta, C/EBP-β）及Cbp/p300结合转化激活因子4（Cbp/p300 interacting transactivator with Glu/Asp rich carboxy-terminal domain 4,CITED4）的基因表达情况；Western blot检测各组细胞中C/EBP-β、脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor, BDNF）、蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein, Bax）及CITED4、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、原癌基因n-Myc的蛋白表达水平。结果 2 000μmol·L^-1Glu处理24 h对PTCSC3细胞有明显的损伤作用；与模型组比较，PTCSC3抑制剂可有效改善Glu诱导SH-SY5Y细胞凋亡率的增加和细胞存活率的下降；明显降低C/EBP-β基因及蛋白、Bax蛋白的表达，促进BDNF、p-Akt、Bcl-2蛋白的表达；增加CITED4、Cyclin D1和n-Myc的表达水平。反之，过表达PTCSC3则出现与上述结果相反的结果。结论 PTCSC3可能通过调控C/EBP-β,进而调控下游信号通路BDNF/Akt和CITED4/Cyclin D1信号通路，改善Glu诱导SH-SY5Y神经细胞的凋亡和生存状态。

关键词

乳头状甲状腺癌易感性候选基因3 / 人神经母细胞瘤细胞 / 细胞凋亡 / 作用 / 分子机制