邻苯二甲酸酯类对人CYP450酶及对HepG2细胞的影响

摘要

目的 探究20种邻苯二甲酸酯（phthalate esters, PAEs）对人肝微粒体中CYP450酶系及肝癌HepG2细胞的影响。方法 采取体外初筛抑制试验探究PAEs对CYP450亚型酶的抑制潜力，通过抑制动力学实验分析判断抑制类型，采用体外-体内外推（in vitro-in vivo extrapolation, IVIVE）法评估抑制效果，利用分子对接模拟试验探讨抑制机制。通过CCK8法、TUNEL实验、JC-1荧光探针检测PAEs对HepG2细胞的影响，Western blot实验测定细胞中CYP亚型酶蛋白表达水平。结果 仅有邻苯二甲酸二环己酯（dicyclohexyl phthalate, DCHP）和邻苯二甲酸单辛酯（monooctyl phthalate, MOP）分别对人CYP1A2和CYP2C9亚型酶呈现较强的非时间依赖、非NADPH依赖的竞争性抑制作用，其半数抑制浓度(half-inhibitory concentration, IC₅₀)值分别为（35.02±4.08）μmol·L^-1和（18.53±2.17）μmol·L^-1。非线性回归分析得出其动力学参数（kinetic parameters,K_i）分别为（20.26±3.96）μmol·L^-1和（14.37±2.06）μmol·L^-1;CCK8结果显示可抑制细胞增殖；TUNEL实验结果显示可导致细胞凋亡；JC-1荧光探针结果显示能使细胞的线粒体膜电位发生改变；Western blot结果显示可降低细胞中CYP1A2和CYP2C9蛋白表达。结论 研究发现DCHP和MOP分别对人CYP1A2和CYP2C9亚型酶有抑制作用，均可抑制HepG2细胞的增殖，导致细胞凋亡，降低蛋白表达。

关键词

邻苯二甲酸酯 / 代谢酶 / 细胞色素P450酶 / 鸡尾酒探针法 / 液相色谱串联质谱法 / HepG2细胞