柱前衍生化RP-HPLC法测定醋酸戈舍瑞林的氨基酸组成

摘要

目的 建立一种测定醋酸戈舍瑞林的氨基酸组成的柱前衍生化RP-HPLC法。方法 醋酸戈舍瑞林在6 mol·L^-1盐酸溶液、110℃条件下水解24 h,水解后的氨基酸与异硫氰酸苯酯50℃加热10 min进行衍生化反应。氨基酸衍生物采用Waters Symmetry^®C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm, 5μm）进行分析，流动相A为0.1 mol·L^-1乙酸钠缓冲液（pH 6.5）-乙腈（体积比97∶3）,流动相B为乙腈-水（体积比80∶20）,梯度洗脱，流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为254 nm,柱温为35℃,进样盘温度为5℃,进样体积为20μL。结果 醋酸戈舍瑞林水解后的8种氨基酸的衍生物能够完全分离（分离度> 2.0）,且在25～250 pmol·μL^-1内各氨基酸线性关系良好（r>0.999）,重复性实验各峰面积RSD均小于5%,回收率均在90.3%～110.5%之间，供试品衍生化溶液在24 h内稳定。用该方法测定3批不同厂家的醋酸戈舍瑞林，样品测定结果均符合欧洲药典的标准。结论 经方法学验证，该方法分离效果较好、准确度较高，适用于醋酸戈舍瑞林的氨基酸组成分析。

关键词

醋酸戈舍瑞林 / 柱前衍生化 / 氨基酸水解 / 异硫氰酸苯酯 / 高效液相色谱