JAK抑制剂对功能获得型JAK3突变细胞增殖抑制作用研究

摘要

目的 构建JAK3功能获得型突变M511I、A572V和A573V点突变细胞株，研究JAK3功能获得型突变成瘤可能性，探索不同JAK抑制剂对其作用效果。方法 利用同源重组构建携带JAK3点突变M511I、A572V和A573V的pLV-C-GFPSpark-JAK3质粒，以慢病毒感染的方法转入Ba/F3细胞中并稳定表达，以细胞因子非依赖性增殖证明其成瘤性，以MTS法验证JAK抑制剂对其增殖抑制作用，以Western-blot证明蛋白表达以及下游STAT5磷酸化调控。结果 利用慢病毒系统成功构建JAK3(WT)以及3个功能获得型突变细胞株(JAK3 M511I、A572V和A573V),通过不同细胞株生长曲线检测发现，JAK3功能获得型突变细胞株具有不依赖细胞因子生长的特点，提示具有一定的成瘤性。开展对不同选择性类型的JAK抑制作用后的细胞增殖抑制和磷酸化下调作用研究，确认JAK3选择性抑制剂Ritlecitinib对功能获得型突变的作用效果最为敏感。结论 JAK3功能获得型突变M511I、A572V和A573V可导致下游信号通路活化，体现出一定的成瘤性。相较于其他类型JAK抑制剂，JAK3选择性抑制剂对JAK3功能获得型突变更为敏感，为JAK3突变致癌机制以及JAK抑制剂肿瘤治疗方面的应用提供了新的思路。

关键词

JAK3突变 / 慢病毒构建 / JAK抑制剂