3-氨基苯并[d]异噁唑类大环ALK抑制剂的设计、合成及活性评价

摘要

目的 间变性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase, ALK）的活性失调与多种癌症的发生密切相关。以恩曲替尼为先导化合物，设计并合成一系列3-氨基苯并[d]异噁唑类ALK抑制剂，测试其对ALK阳性的人肺腺癌H2228细胞的抑制活性。方法 以邻甲氧基苯甲醛为起始原料，经过还原性C-C偶联、杂环合成和酰胺缩合得到目标化合物A1。以间羟基苯甲酸甲酯和水杨酸甲酯为起始原料，经亲核取代、水解酸化得到中间体5a、5b、13a和13b。以水杨醛及取代水杨醛为起始原料，经过还原性C-C偶联、亲核取代、杂环合成、酰胺缩合、Boc保护与脱保护，以及分子内烯烃复分解反应最终合成得到B、C、D系列大环化合物B1-B4、C1-C4和D1-D7。以恩曲替尼为阳性对照药，使用ALK阳性人肺腺癌H2228细胞株和ALK阴性的人非小细胞肺癌A549细胞株，采用CCK-8法测试目标化合物对细胞株的抑制活性。采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞实验测试化合物B1对H2228肿瘤细胞的凋亡诱导情况。对目标化合物B1和D1进行了ALK酶抑制活性测试。结果与结论合成了16个3-氨基苯并[d]异噁唑类化合物，其中B、C、D系列化合物为大环结构，其结构经核磁共振氢谱和碳谱及高分辨质谱确证。体外H2228肿瘤细胞增殖抑制实验结果表明，化合物B1的抑制活性最佳，IC₅₀=（16.55±3.79）μmol·L^-1。细胞凋亡实验表明B1能够浓度依赖性地诱导H2228细胞凋亡。ALK体外酶抑制活性实验中B1和D1的IC₅₀分别为303.7 nmol·L^-1和288.0 nmol·L^-1。

关键词

3-氨基苯并[d]异噁唑 / ALK抑制剂 / 大环化合物