重组弹性蛋白rhELT的表达及抗敏特性

摘要

目的 构建一种具有抑制炎症反应和舒缓过敏生物活性的重组弹性蛋白。方法 利用大肠杆菌系统构建表达并获得重组弹性蛋白rhELT。在细胞学实验方面，检测了皮肤屏障的完整性，对刺激的响应及炎性因子的影响：人表皮角质形成细胞（normal human epidermal keratinocytes cells, NHEK）丝聚蛋白（filaggrin, FLG）和兜甲蛋白（loricrin, LOR）的表达，人永生化角质细胞（human keratinocytes cells, HaCat）辣椒素受体（transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1）相关基因表达，小鼠单核巨噬细胞（mouse mononuclear macrophages cells, RAW264.7）肿瘤坏死因子-α（TNF-α）促分泌检测，小鼠肥大细胞瘤细胞（murine mastocytoma cells, P815）脱颗粒模型；此外，还利用斑马鱼炎症模型、豚鼠急性瘙痒模型和C57 BL/6小鼠慢性瘙痒模型来评价重组弹性蛋白rhELT的抗敏及修复特性。结果 在rhELT蛋白的给药浓度为20μg·mL^-1时，NHEK细胞中FLG和LOR上调5.57倍和4.70倍（P<0.001 vs空白组）;rhELT蛋白显著抑制辣椒素刺激的HaCat细胞中TRPV1的mRNA转录（P<0.01 vs模型组）;rhELT蛋白显著抑制了脂多糖诱导的巨噬细胞RAW264.7中TNF-α分泌（P<0.01 vs模型组）;P815细胞的脱颗粒率降低了65.76%（P<0.001 vs模型组）;rhELT蛋白对斑马鱼炎症同样有明显的抑制作用；300μg·g^-1 rhELT蛋白组明显抑制了4-氨基吡啶引起的豚鼠变态反应，改善了丙酮-乙醚涂抹导致的小鼠皮肤干燥及脱屑症状。结论 表达的rhELT蛋白在皮肤屏障功能、抑制炎症反应和舒缓方面具有生物活性，为基于rhELT蛋白开发新型功能性生物原料提供了科学依据。

关键词

弹性蛋白 / 皮肤屏障 / 抗炎 / 抗敏 / 瘙痒