基于nanoLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS技术分析整蛋白型肠内营养制剂中的蛋白质组成

摘要

目的 基于纳升高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱（nanoLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS）法结合蛋白质组学鸟枪法（shotgun proteomics）研究策略鉴定整蛋白型肠内营养制剂中的蛋白质组成。方法 色谱分离采用C₁₈-AQ毛细管色谱柱（200 mm×75μm, 1.9μm）,以体积分数为0.1%甲酸溶液（A）-体积分数为80%乙腈溶液（含有体积分数为0.1%甲酸）(B)为流动相体系，梯度洗脱，流速200 nL·min^-1,柱温24℃,进样量1μL。质谱采用纳米电喷雾电离离子源，在正离子全扫描模式下对整蛋白型肠内营养制剂中的蛋白质进行分离和分析，然后采用Proteome Discoverer软件检索相关蛋白质数据库进行蛋白质鉴定。结果 不同整蛋白型肠内营养制剂鉴定出的蛋白质类型主要分为乳清蛋白、酪蛋白和大豆蛋白三类。乳清蛋白类包括α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、白蛋白和糖基化依赖性细胞黏附分子-1;酪蛋白类包括αs1-酪蛋白、αs2-酪蛋白，β-酪蛋白和κ-酪蛋白；大豆蛋白类包括大豆球蛋白、β-大豆伴球蛋白和Cupin type-1结构域蛋白。结论 首次采用nanoLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS技术结合蛋白质组学鸟枪法研究策略对整蛋白型肠内营养制剂中的蛋白质组成进行分析，弥补了此类型肠内营养制剂蛋白类成分研究的空白，为产品质量控制、配方开发优化和个体化临床营养支持提供了重要的理论依据。

关键词

肠内营养 / 整蛋白型肠内营养剂 / 纳升高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱 / 蛋白质鉴定

基金资助

广东省科技创新战略专项基金资助项目(2022B1212020004); 深圳市发展和改革委员会资助项目(XMHT20220104010); 深圳市科技计划资助项目(KJZD20230923114203007)