基于慢性心衰大鼠探寻四逆汤复方合煎“存效减毒”作用机制

摘要

目的 四逆汤作为毒效中药配伍应用之典范，方中君药附子“毒”在心脏，然复方合煎“效”治心衰，复方合煎实现“存效减毒”。在复方合煎过程中以水为媒，充分实现众药配伍，煎液中双酯型生物碱含量下降，单酯型生物碱含量上升，显“存效减毒”之功。本文作者拟通过药效学、代谢组学、分子生物学等方面，揭示古今四逆汤对慢性心衰大鼠“存效减毒”的主要机制。方法 50只SD大鼠随机分为正常组、模型组(采用阿霉素（DOX）诱导大鼠慢性心衰模型)、“仲景法四逆汤”+DOX组(5.0 g·kg^-1)、“药典法四逆汤”+DOX组(5.0 g·kg^-1)、“仲景法四逆汤”组(5.0 g·kg^-1),给药结束后，观察大鼠一般状况及体质量、心脏超声指标；Elisa检测血清心肌损伤标志物水平（BNP、LDH、CK、cTnT、Ang-Ⅱ、ET-1和ALD）;HE、Masson、TUNEL染色观察心肌组织形态学变化；对大鼠心肌组织样品进行代谢组学分析，筛选组间差异代谢物，并分析差异代谢通路；采用蛋白免疫印迹法及免疫组化检测了心脏能力代谢有关的PPARα信号通路中PPARα、PGC-1α、Sirt3、ANT和P300在心肌组织蛋白的表达水平。结果 “仲景法四逆汤”和“药典法四逆汤”对慢性心衰大鼠均有良好疗效，无显著性差异；古今四逆汤均能调节如精氨酸和脯氨酸代谢和D-谷氨酸代谢等与能量代谢紊乱有关的代谢通路；古今四逆汤均可通过激活PPARα信号通路，调节心脏至正常能量代谢水平。此外，“仲景法四逆汤”对正常大鼠无明显的心脏毒性和不良反应。结论 “仲景法四逆汤”和“药典法四逆汤”的制备方法差异未对其功效的发挥造成影响，古今四逆汤改善慢性心衰大鼠的作用机制可能与能量代谢相关通路的调节以及PPARα通路激活相关，有利于探索经典名方四逆汤复方合煎“减毒增效”机制。此外，本研究揭示了“仲景法四逆汤”在当时历史背景下使用的科学内涵，这为四逆汤治疗慢性心衰的作用机制及其临床应用研究提供参考。

关键词

四逆汤 / 慢性心衰大鼠 / 代谢组学 / PPARα通路

基金资助

国家自然科学基金-区域创新发展联合基金重点项目(U21A201100); 四川省自然科学基金项目(2023NSFSC0688); 成都中医药大学“杏林学者”青基人才专项(QJRC2023017)