半夏刺激性蛋白分子量的确定及氨基酸组成解析

摘要

目的 确定半夏刺激性蛋白的分子量及氨基酸组成。方法 采用Tris-HCl缓冲溶液法提取半夏总蛋白，利用硫酸铵沉淀法、SP-Sepharose HP离子交换柱色谱法与Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱法分离、纯化半夏蛋白。然后采用小鼠腹膜炎症模型评估半夏蛋白的刺激性。进一步利用SDS-PAGE和高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)及凝胶色谱-示差-多角度激光光散射(GPC-RI-MALS)法测定蛋白的分子量。最后，采用高效液相色谱法与Nano-UPLC-Q-Exactive HF对蛋白进行氨基酸组成分析和鉴定。结果 40%饱和度硫酸铵沉淀半夏蛋白(PT-40)能显著增加小鼠腹腔内液中的蛋白渗出量和PGE2含量，进一步分离得到的刺激性蛋白(PTP-1)被鉴定为分子量约为56 kD的均质四聚体蛋白，由4个14 kD亚基组成。氨基酸组成分析和Nano-UPLC-Q-Exactive HF鉴定确认PTP-1为半夏凝集素蛋白，与已知具有刺激性的凝集素蛋白的氨基酸组成具有高度相似性。结论 成功确定半夏刺激性蛋白PTP-1的分子量及氨基酸组成，为半夏刺激性凝集素蛋白分子量的确定提供了依据，同时为半夏的临床应用和新药开发提供了科学参考。

关键词

半夏 / 凝集素蛋白 / 分子量 / 氨基酸组成