氧化苦参碱抑制CD4⁺T细胞活化改善自身免疫性肝炎的作用机制研究

摘要

目的 研究氧化苦参碱（oxymatrine, OMT）对刀豆蛋白（concanavalin A,ConA）诱导的自身免疫性肝炎的保护作用，并揭示其作用机制。方法 采用尾静脉注射ConA诱导免疫性肝损伤。将ICR小鼠随机分为正常组、模型组(ConA,15 mg·kg^-1)、低剂量组(LOMT,50 mg·kg^-1)、高剂量组(HOMT,100 mg·kg^-1)和水飞蓟素阳性组(silymarin, 100 mg·kg^-1)。氧化苦参碱预给药后，通过谷丙转氨酶（alanine aminotransferase, ALT）和谷草转氨酶（aspartate aminotransferase, AST）试剂盒、H&E染色、流式细胞术、ELISA试剂盒等评价肝保护作用。CCK-8试剂盒和ELISA试剂盒分别检测OMT对ConA诱导的脾细胞增殖和细胞因子生成的影响。通过乳酸的生成和Glut1、HK2以及LDHA的表达评估糖酵解水平。蛋白印迹分析PI3K/Akt信号通路。结果 与正常组相比，模型组ALT和AST水平显著升高，肝组织坏死区域增加。炎症因子IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ和炎症相关蛋白iNOS、Cox-2表达上调。同时，MDA水平增加，SOD、CAT和T-AOC水平降低。与模型组相比，OMT预给药后能有效降低血浆中AST和ALT水平，减少肝组织坏死区域。炎症因子IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ和炎症相关蛋白iNOS、Cox-2表达也显著下调。此外，OMT抑制MDA生成，增加SOD、CAT和T-AOC水平，抑制氧化应激。流式结果显示，与正常组相比，模型组中Th1、Th2和Th17细胞比例显著升高，Treg细胞代偿性增加。与模型组相比，OMT降低了脾脏中Th1、Th2和Th17细胞的比例，但对Treg细胞没有显著影响。在体外实验中，OMT (10μmol·L^-1)显著抑制ConA诱导的脾细胞增殖和细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-17的分泌。值得注意的是，糖酵解也被显著抑制，表现为乳酸生成减少，Glut1、HK2和LDHA表达降低。此外，PI3K/Akt信号通路也被抑制，表现为p-PI3K和p-Akt水平降低。结论 氧化苦参碱可通过抑制CD4⁺ T细胞介导的炎症反应和氧化应激，保护ConA诱导的免疫性肝损伤，作用机制与抑制PI3K/Akt通路介导的糖酵解有关。

关键词

氧化苦参碱 / 免疫性肝损伤 / 刀豆蛋白 / CD4⁺ T细胞 / 糖酵解

基金资助

国家自然科学基金资助项目(82160777)