上调miR-378b抑制ALX4甲基化、抑制甲状腺癌细胞上皮-间质转化、侵袭和迁移

摘要

目的 探讨miR-378b通过ALX4调节甲状腺癌细胞的上皮-间质转化以及侵袭和迁移能力。方法 MSP法检测甲状腺癌细胞ALX4基因甲基化状态，用去甲基化药物5-aza-dc处理甲状腺癌细胞后，通过MSP法、RT-PCR和Western blot探究ALX4表达与启动子甲基化的关系；将miR-378b mimics/inhibitors转染甲状腺癌细胞后，通过MSP法检测miR-378b对ALX4甲基化的影响，通过RT-PCR、Western blot检测miR-378b对ALX4以及上皮-间质转化相关因子HMGA1、N-cadherin、Vimentin表达的影响，通过Transwell^TM实验检测甲状腺癌细胞的侵袭迁移情况；荧光素酶活性分析实验验证ALX4是miR-378b的作用靶点；pcDNA3.1-ALX4质粒过表达甲状腺癌细胞后，检测ALX4对细胞上皮-间质转化以及侵袭迁移能力的影响。结果 与正常的甲状腺细胞比较，甲状腺癌细胞中ALX4基因发生了甲基化，导致ALX4表达受抑制；miR-378b mimics转染甲状腺癌细胞后，抑制ALX4甲基化发生，促进ALX4表达，抑制甲状腺癌细胞上皮-间质转化相关因子HMGA1、N-cadherin、Vimentin的表达，抑制细胞的侵袭迁移能力；miR-378b靶向作用ALX4基因的3′非翻译区（3′UTR）;过表达pcDNA3.1-ALX4后，抑制HMGA1、N-cadherin、Vimentin的表达，抑制细胞侵袭迁移能力。结论 miR-378b通过抑制ALX4甲基化的发生从而抑制甲状腺癌细胞上皮-间质的转化以及细胞的侵袭和迁移能力。

关键词

甲状腺癌细胞 / miR-378b / ALX4甲基化 / 细胞上皮-间质的转化 / 侵袭和迁移