Aggrecan过表达质粒修饰BMSC-外泌体联合丝素蛋白支架对软骨缺损的修复作用

摘要

目的 探究Aggrecan过表达质粒修饰BMSC-外泌体联合丝素蛋白支架对软骨缺损的修复作用。方法 以健康清洁级新西兰大白兔为研究对象，提取大白兔后腿股骨内骨髓组织进行BMSCs的培养，利用流式细胞仪进行鉴定。利用Cas-9技术构建多聚蛋白多糖(aggrecan)的过表达载体，利用慢病毒介导转染BMSCs,然后提取外泌体(exosome),联合丝素蛋白支架，构建软骨缺损治疗的联合体系，利用番红染色和Micro-CT等方法检测联合体系的修复效果，利用免疫组织化学染色和RT-PCR定量分析修复软骨组织中的Aggrecan和Ⅱ型胶原蛋白的含量。结果 BMSCs-exo+丝素蛋白支架组膝关节软骨缺损处组织修复较好，软骨缺损愈合完全，组织严密，多为软骨组织，软骨缺损处填充物中Ⅱ型胶原蛋白表达较多，兔膝关节软骨缺损修复组织的Collagen II和Aggrecan mRNA表达水平明显高于BMSCs+丝素蛋白支架组和Aggrecan过表达载体修饰BMSCs组。结论 Aggrecan过表达载体转染BMSCs来源的外泌体联合丝素蛋白支架系统可以发挥更有效的软骨修复作用。

关键词

多聚蛋白多糖 / 过表达载体 / 外泌体 / 骨髓间充质干细胞 / 丝素蛋白支架 / 新西兰大白兔