miRNA-1285-3p靶向TLR4对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的影响

摘要

目的 探究微小RNA-1285-3p(miR-1285-3p)靶向Toll样受体4(TLR4)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的影响。方法 大鼠肺泡巨噬细胞NR8383为研究对象，实验分为对照组、LPS组(10μg/mL LPS刺激)、LPS+mimic NC组(转染50 nmol/L mimic NC后48 h用10μg/mL LPS刺激)、LPS+miR-1285-3p mimic组(转染50 nmol/L miR-1285-3p mimic后48 h用10μg/mL LPS刺激)、LPS+miR-1285-3p+vector组(pc DNA3.1空载体和miR-1285-3p mimic转染细胞后用10μg/mL LPS刺激)、LPS+miR-1285-3p+TLR4组(pc DNA3.1 TLR4和miR-1285-3p mimic转染细胞后用10μg/mL LPS刺激)。实时荧光定量PCR(RT-qRCR)检测细胞中miR-1285-3p、TLR4 mRNA水平；双荧光素酶鉴定miR-1285-3p与TLR4的靶向关系；蛋白质免疫印迹(WB)检测细胞中TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白水平；酶联免疫吸附(ELISA)检测细胞上清液中白介素IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果 LPS处理可降低大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中miR-1285-3p水平，升高TLR4 mRNA和蛋白、MyD88、NF-κB p65蛋白以及上清液中IL-6、IL-8、TNF-α水平。过表达miR-1285-3p可降低大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中TLR4 mRNA和蛋白、MyD88、NF-κB p65蛋白以及上清液中IL-6、IL-8、TNF-α水平。上调TLR4表达可减弱过表达miR-1285-3p对LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的抑制作用。双荧光素酶和RT-qRCR实验证实miR-1285-3p靶向负调控TLR4表达。结论 过表达miR-1285-3p可通过靶向下调TLR4表达减轻LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应。

关键词

微小RNA-1285-3p / Toll样受体4 / 脂多糖 / 肺泡巨噬细胞 / 炎症反应 / 大鼠