RNF13通过泛素化调控Keap1/Nrf2信号通路改善非酒精性脂肪肝

摘要

目的 探讨E3泛素连接酶RNF13能否通过泛素化调控Keap1/Nrf2信号通路改善非酒精性脂肪肝(NAFLD)。方法 采用加入棕榈酸和油酸的方法构建NAFLD细胞模型，通过慢病毒载体转染方法敲低RNF13基因，通过Western blot、免疫共沉淀(Co-IP)以及ROS和MDA水平的检测，评估RNF13对NAFLD细胞Keap1/Nrf2通路及氧化应激的影响。Western blot检测NAFLD细胞RNF13、Keap1、Nrf2蛋白表达水平的变化。利用泛素化测定和Co-IP,检测RNF13与Keap1之间的相互作用及其对Keap1泛素化降解的影响。结果 敲低RNF13降低了HepG2细胞中ROS和MDA的水平，抑制Keap1蛋白的表达，上调Nrf2蛋白的表达，但mRNA表达水平无明显差异；Co-IP结果显示RNF13与Keap1存在直接相互作用；泛素化实验结果表明，RNF13敲低延长了Keap1的半衰期，降低其泛素化水平。RNF13通过与Keap1竞争性结合来稳定Nrf2,从而有效减弱HepG2细胞的氧化应激反应。结论 RNF13通过泛素化调控Keap1/Nrf2信号通路改善NAFLD。

关键词

非酒精性脂肪肝病 / 泛素化 / E3泛素连接酶 / Kelch样ECH相关蛋白1 / 核因子E2相关因子2