lncRNA NEAT1调节miR-27a-3p/CRY2轴对骨质疏松大鼠成骨细胞分化的影响

摘要

目的 探究长链非编码RNA核旁斑点组装转录本1(lncRNA NEAT1)调节微小RNA-27a-3p(miR-27a-3p)-隐花色素基因2(CRY2)轴对骨质疏松(OP)大鼠成骨细胞分化的影响。方法 建立OP大鼠模型，造模成功后分为对照组、假手术组及模型组，qRT-PCR检测大鼠股骨组织中lncRNA NEAT1、miR-27a-3p、CRY2 mRNA的表达水平，HE染色观察股骨组织病理结构，免疫组化检测Runx2蛋白表达。体外培养大鼠成骨细胞ROS172.8并进行诱导分化，将成骨细胞分为Control、sh-NC、sh-lncRNA NEAT1、sh-lncRNA NEAT1+anti-NC、sh-lncRNA NEAT1+anti-miR-27a-3p组，各组转染相应质粒后，用qRT-PCR法检测细胞中lncRNA NEAT1、miR-27a-3p、CRY2 mRNA水平；双荧光素酶实验测定靶向关系；MTT法检测细胞增殖；茜素红染色和ELISA法分别检测成骨细胞矿化结节和细胞ALP水平；Western blot检测增殖和成骨分化标志物(OCN、OPN、Runx2)蛋白表达。结果 OP大鼠骨组织lncRNA NEAT1、CRY2 mRNA表达上升，miR-27a-3p、Runx2表达降低，大鼠股骨组织有明显病变，骨小梁断裂，间距增大。lncRNA NEAT1与miR-27a-3p以及CRY2与miR-27a-3p之间均存在靶向作用。敲低lncRNA NEAT1后，细胞lncRNA NEAT1、CRY2表达下降，miR-27a-3p、Ki67、ALP、OCN、OPN、Runx2表达、细胞增殖活性、矿化结节增加；下调miR-27a-3p减弱lncRNA NEAT1敲低对上述指标的影响。结论 沉默lncRNA NEAT1表达可通过调节miR-27a-3p/CRY2轴促进骨质疏松大鼠成骨细胞分化。

关键词

骨质疏松 / 长链非编码RNA核旁斑点组装转录本1 / 微小RNA-27a-3p / 隐花色素基因2 / 成骨细胞 / 分化