LncRNA GATA2-AS1调节miR-431-5p/TIMP1轴对胃癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响

摘要

目的 探究长链非编码核糖核酸(LncRNA)GATA结合蛋白2反义RNA1(LncRNA GATA2-AS1)调节微小RNA-431-5p(miR-431-5p)/基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)轴对胃癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法 将HGC-27细胞随机分为对照组(Control组)、si-GATA2-AS1组、si-NC组、si-GATA2-AS1+anti-miR-431-5p组、si-GATA2-AS1+anti-NC组，除Control组外，其余组转染相应的质粒；实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测胃癌组织及细胞中miR-431-5p、LncRNA GATA2-AS1水平；双荧光素酶检测LncRNA GATA2-AS1与miR-431-5p及TIMP1与miR-431-5p的靶向关系；细胞划痕实验与Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭；免疫印迹(Western blot)法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、TIMP1、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、波形蛋白(Vimentin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)表达情况；裸鼠移植瘤实验验证LncRNA GATA2-AS1对胃癌肿瘤生长及miR-431-5p/TIMP1轴的影响。结果 在胃癌组织及细胞中，LncRNA GATA2-AS1水平升高，miR-431-5p水平降低(P<0.05);生物信息学分析和双荧光素酶结果显示，LncRNA GATA2-AS1与miR-431-5p及TIMP1与miR-431-5p之间存在靶向结合位点；沉默GATA2-AS1可上调miR-431-5p、E-cadherin表达，下调细胞划痕愈合率、细胞侵袭数量及TIMP1、LncRNA GATA2-AS1、MMP-9、N-cadherin、MMP-2、Vimentin表达(P<0.05);抑制miR-431-5p表达可逆转沉默GATA2-AS1对胃癌细胞迁移、侵袭及EMT的抑制作用(P<0.05);裸鼠移植瘤实验结果显示，沉默GATA2-AS1可延缓裸鼠移植瘤生长，减轻重量，下调LncRNA GATA2-AS1、TIMP1表达，上调miR-431-5p表达(P<0.05)。结论 在胃癌细胞中下调LncRNA GATA2-AS1可通过调节miR-431-5p/TIMP1信号轴，抑制胃癌细胞迁移、侵袭及EMT。

关键词

长链非编码RNA GATA结合蛋白2-反义RNA1 / 微小RNA-431-5p / 胃癌 / 迁移 / 侵袭 / 上皮间质转化

基金资助

秦皇岛市科学技术局项目(202301A218)