解整合素-金属蛋白酶8对急性酒精性肝损伤小鼠中肝细胞增殖与凋亡的调控作用

摘要

目的 探讨解整合素-金属蛋白酶8(A disintegrin and metalloprotease 8,ADAM8)对急性酒精性肝损伤小鼠中肝细胞增殖与凋亡的影响。方法 选择6～8周龄的KM小鼠30只，随机分为5组：正常对照组(n=6)、模型组(n=6)、ADAM8-sgRNA1组(n=6)、ADAM8-sgRNA2组(n=6)、ADAM8-sgRNA3组(n=6)。正常对照组小鼠不做任何处理，质粒组小鼠分别尾静脉注射3种质粒，模型组小鼠尾静脉注射等量生理盐水；将模型组和质粒组小鼠常规喂养3 d,通过一次经口灌胃50%酒精14 mL/kg诱导小鼠急性肝损伤。检测各组小鼠AST、ALT水平，HE染色观察其病理学变化，PAS染色观察肝组织糖原变化；Western blotting检测ADAM8、TNF-α、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、BCL2关联X蛋白(BCL2-associated X protein, Bax)的表达水平。结果 与模型组相比，ADAM8-sgRNA2组ADAM8的表达水平明显降低(P<0.05);与正常对照组相比，模型组PCNA的表达水平明显降低(P<0.001),TNF-α、Bax的表达水平明显升高(P<0.01);与模型组相比，ADAM8-sgRNA2组PCNA表达水平显著升高(P<0.001),TNF-α、Bax表达水平显著下降(P<0.01)。与正常对照组相比，模型组AST、ALT指标显著升高(P<0.05);与模型组相比，ADAM8-sgRNA2组AST、ALT指标显著下降(P<0.05)。HE染色和PAS染色结果显示：与正常对照组相比，模型组肝损伤明显，坏死积分显著升高(P<0.05),糖原含量显著减少(P<0.001);与模型组相比，ADAM8-sgRNA2组坏死积分明显降低(P<0.05),ADAM8-sgRNA2组糖原含量明显上升(P<0.001)。结论 ADAM8过表达可抑制急性酒精性肝损伤小鼠中肝细胞的增殖并促进肝细胞的凋亡。

关键词

急性酒精性肝损伤 / 解整合素-金属蛋白酶8 / CRISPR/Cas9 / 增殖 / 凋亡