PI3Kγ调控肿瘤相关巨噬细胞表型影响胆管癌细胞EMT进程与干性特征

摘要

目的 探究磷酸肌醇3-激酶γ(phosphatidylinositide3-kinaseγ,PI3Kγ)调控肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associatedmacrophage, TAM)表型影响胆管癌细胞EMT进程及干性特征的作用。方法 利用佛波酯(Phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA)和IL-4诱导建立M2型TAM,并使用PI3Kγ抑制剂AS605240进行干预，观察细胞形态变化，免疫细胞荧光染色检测细胞表面M2特异性表型标志物CD163表达情况。建立M2型TAM与人胆管癌细胞系QBC-939共培养体系，分组为对照组、M2组、PI3Kγ抑制剂组，进行对应处理后收集QBC-939细胞，Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力，免疫细胞荧光染色观察细胞内E-cadherin与Vimentin表达，Western blotting检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP2及MMP9蛋白表达，肿瘤细胞成球实验检测细胞干性，Western blotting检测细胞中肿瘤干细胞相关蛋白CD133、OCT4及SOX2蛋白表达。结果 经PMA和IL-4诱导后，细胞呈典型M2型形态，CD163荧光强度明显增加，但经PI3Kγ抑制剂干预后，M2型细胞数目明显减少，CD163荧光强度减弱。与M2组比较，PI3Kγ抑制剂组细胞迁移数目与侵袭数目均减少(P<0.05),E-cadherin荧光密度值升高、Vimentin荧光密度值降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平上调而N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9蛋白表达水平均下调(P<0.05),同时，肿瘤细胞成球数量减少(P<0.05),CD133、OCT4及SOX2蛋白表达水平均下调(P<0.05)。结论 抑制PI3Kγ能够抑制M2型TAM表型转化，从而抑制胆管癌细胞的EMT进程及肿瘤干性特征，发挥抗癌作用。

关键词

胆管癌 / 磷酸肌醇3-激酶γ / 肿瘤相关巨噬细胞 / 上皮-间质转化 / 干性