三结构域蛋白21对非酒精性脂肪性肝病的影响及机制研究

摘要

目的 探讨三结构域蛋白21(tripartite motif containingprotein 21,TRIM21)对游离脂肪酸(free fatty acid, FFA)诱导的肝细胞脂质沉积的影响，并探讨核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)及相关基因在该过程中的作用。方法 用TRIM21敲低慢病毒及TRIM21过表达质粒分别感染及转染细胞，构建TRIM21基因干扰体外模型并使用qRT-PCR和Western blotting实验进行模型验证；验证FFA诱导非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)体外模型方法的可行性；干扰TRIM21表达后建立NAFLD体外模型，油红O染色检测细胞脂质沉积情况；DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧水平；qRT-PCR检测Nrf2、Keap1、HO-1 mRNA表达水平；Western blottingting检测Nrf2、Keap1蛋白表达水平；免疫荧光检测Nrf2蛋白在细胞内的分布情况。结果 (1)油红O染色结果表明：敲低TRIM21表达减少FFA诱导的肝细胞内脂质沉积(P<0.05),过表达TRIM21增加FFA诱导的肝细胞内脂质沉积(P<0.05)。(2)细胞内ROS水平检测结果显示：敲低TRIM21表达，胞内ROS水平降低(P<0.05),TRIM21过表达时胞内ROS水平升高(P<0.05)。(3)qRT-PCR检测结果显示：敲低TRIM21表达，Nrf2、Keap1、HO-1 mRNA表达增加(P<0.05),TRIM21过表达时，Nrf2 mRNA表达增加(P<0.01),Keap1、HO-1表达减少(P<0.05)。(4)Western blotting结果显示：敲低TRIM21表达，Nrf2蛋白表达减少(P<0.01),Keap1蛋白表达增加(P<0.001),TRIM21过表达时Nrf2蛋白表达增加(P<0.05),Keap1蛋白表达减少(P<0.0001)。(5)敲低TRIM21表达Nrf2免疫荧光染色平均荧光强度(细胞核/细胞质)较对照组增加(P<0.001),TRIM21过表达时Nrf2平均荧光强度较对照组减少(P<0.001)。结论 干扰TRIM21表达可能通过调节Nrf2及相关蛋白来影响FFA诱导的细胞脂质沉积，进而影响NAFLD发生发展过程。

关键词

非酒精性脂肪性肝病 / 三结构域蛋白21 / 核因子E2相关因子2