BCAT1在食管鳞癌发生发展中的机制研究

摘要

目的 探讨BCAT1在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)发生发展中的相关分子机制。方法 质谱分析鉴定BCAT1的互作蛋白PKM2,Co-IP检测其两者存在的相互作用和分子机制。结果 质谱结合Co-IP实验证明BCAT1与PKM2存在相互作用。Western blotting结果显示，与Control组和BCAT1-siRNA组相比，BCAT1-siRNA联合MG132组的PKM2蛋白表达水平呈现明显增高的趋势；BCAT1过表达组中采用CHX处理的细胞中PKM2的蛋白半衰期显著短于空载体组。免疫共定位结果表明BCAT1和PKM2共定位于ESCC细胞胞质。Co-IP实验结果表明，E3泛素连接酶Parkin与PKM2存在互作。Western blotting结果表明，与Control组相比，Parkin siRNA组中PKM2蛋白表达增加；与NC组相比，Parkin-OE组中PKM2的表达降低。泛素实验结果表明Parkin过表达增加了PKM2的降解水平。此外，与Parkin-OE组相比，Parkin-OE联合MG132组的PKM2蛋白表达水平显著增高。结论 ESCC细胞中BCAT1与PKM2存在互作，BCAT1依赖于泛素-蛋白酶体途径调控ESCC细胞中PKM2的表达水平。ESCC细胞中Parkin与PKM2的互作导致PKM2的降解，进而抑制ESCC的进展。

关键词

食管鳞癌 / 支链氨基酸转移酶1 / 糖酵解 / 泛素化