Rg1通过调控miR-34a-5p/DDX17轴改善非酒精性脂肪性肝病分子机制的研究

摘要

目的 研究人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSCs-T6)活力、增殖能力、炎性因子含量和纤维化水平的改善作用及其分子机制。方法 使用TGF-β1诱导HSCs-T6细胞构建肝纤维化细胞模型后，用不同浓度Rg1处理细胞，通过CCK-8检测筛选出最佳作用浓度和时间。采用质粒转染用来干预HSCs-T6细胞中DDX17、miR-34a-5p的表达水平，分别用CCK-8和EdU试剂盒检测HSCs-T6细胞活力和增殖能力，ELISA检测炎性因子(TNF-α、IL-6、IL-10)的含量，qRT-PCR实验检测纤维化相关蛋白(α-SMA、COL1、TIMP-1)基因的mRNA表达水平，Western blotting检测纤维化相关蛋白(α-SMA、COL1、TIMP-1)的表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验和RIP实验验证miR-34a-5p和DDX17的靶向结合关系。结果 Rg1(2.5μg/mL)处理HSCs-T6细胞24 h显著降低TNF-α和IL-6的水平，增加了抗炎的IL-10的水平，显著降低α-SMA、COL1、TIMP-1基因的mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。与TGF-β组相比，过表达DDX17能够改善TGF-β1诱导的HSCs-T6细胞活力、增殖能力、炎症因子和α-SMA、COL1、TIMP-1基因mRNA和蛋白的表达(P<0.05),而沉默DDX17则产生相反作用(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-34a-5p mimic降低DDX17-WT的荧光素酶活性(P<0.05)。与TGF-β1组相比，过表达miR-34a-5p促进HSCs-T6细胞活力、增殖能力、促炎因子、纤维化相关基因mRNA和蛋白的表达；干扰miR-34a-5p则产生相反作用。在回复实验中，与TGF-β1/Rg1相比，过表达miR-34a-5p可显著降低HSCs-T6细胞活力和增殖能力、促炎因子、α-SMA、COL1、TIMP-1基因mRNA和蛋白的表达，而同时过表达miR-34a-5p和DDX17则逆转了miR-34a-5p的上述作用。结论 人参皂苷Rg1通过调节miR-34a-5p/DDX17轴改善非酒精性脂肪性肝病的肝纤维化。

关键词

非酒精性脂肪性肝病 / 人参皂苷Rg1 / miR-34a-5p / DDX17 / 肝纤维化