幽门螺杆菌nikS启动子T重复变异调控细菌毒力的研究

摘要

目的 分析国内幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）镍调节sRNA基因nikS启动子区域中胸腺嘧啶重复序列（T-repeat）长度变异特征，探讨序列变异对细菌毒力表达的调控作用和细菌致病力的影响。方法 收集125株H.pylori临床分离株（胃癌来源55株，胃炎来源70株）,PCR扩增nikS启动子区并测序；Clustal W比对序列；qPCR方法检测nikS和毒力基因cagA转录的相对表达水平；建立H.pylori感染AGS胃上皮细胞模型，尿素酶实验检测H.pylori对AGS细胞黏附率；利用qPCR和ELISA方法分别检测H.pylori感染AGS细胞中TNF-α和IL-8的mRNA和蛋白表达水平。结果 H.pylori nikS启动子-10区上游T-repeat序列的长度在125株临床分离株中呈高度变异：从7～19个T碱基。依据含有重复T碱基数量将H.pylori分为：S组（7～13T）和L组（14～19 T）。其中，L组胃癌患者占比（50.00%）高于S组（29.73%）,差异有统计学意义（χ²=4.344,P<0.05）;转录分析发现L组nikS相对表达量显著低于S组，L组cagA mRNA相对表达量明显高于S组，差异均有统计学意义（P<0.05）。H.pylori感染AGS细胞实验分析发现，L组H.pylori黏附胃上皮细胞能力显著高于S组（50.83%vs 15.30%,P<0.05）;qPCR和ELISA检测结果表明L组H.pylori诱导胃上皮细胞TNF-α的mRNA相对表达量和TNF-α分泌量均高于S组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 国内H.pylori菌株nikS启动子-10区上游T-repeat序列长度呈高度变异。这种序列变异通过调控nikS的转录，进一步调控cagA的表达及细菌致病能力。

关键词

幽门螺杆菌 / sRNA / nikS / cagA / 调节因子 / 毒力

基金资助

国家自然科学基金青年科学基金项目(81602144)