APPL1调控胃癌细胞增殖及其相关机制研究

摘要

目的 利用质粒转染技术制备过表达磷酸酪氨酸衔接蛋白1（adaptor protein containing PH, domain, PTB domain and leucine zipper motif 1, APPL1）基因的SGC-7901胃癌细胞系，观察过表达APPL1对胃癌细胞增殖能力的影响。方法 采用体外培养技术传代，构建携带APPL1基因的质粒，通过慢病毒感染技术转染SGC-7901胃癌细胞并设置为实验组；空白质粒转染后的SGC-7901胃癌细胞作为对照组。Western blotting及RT-qPCR法检测转染后的细胞APPL1表达情况；噻唑蓝试验（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT）及5-溴脱氧尿苷（bromodeoxyuridine, BrdU）检测实验组细胞增殖能力的变化；碘化丙啶染色法检测实验组细胞周期的变化；Western blotting法检测实验组细胞周期蛋白的表达水平。结果 实验组细胞APPL1蛋白及mRNA表达量明显上调，MTT及BrdU实验结果显示，实验组细胞增殖能力明显增强；PI染色法检测显示，实验组细胞处于G₁期比例降低，S期细胞比例升高；Western blotting实验显示，实验组细胞促进了Cyclin D1的表达，抑制了p16、p27的表达，对Cyclin E、p21、p57的表达无明显影响。结论 通过质粒转染技术能够制备过表达APPL1的胃癌细胞系，转染成功的胃癌SGC-7901细胞系增殖能力变强。

关键词

胃癌 / 磷酸酪氨酸衔接蛋白1 / 增殖