miR-122通过调控铁死亡途径对肝癌HepG-2细胞生长的影响研究

摘要

目的 探究miR-122通过调控铁死亡途径对肝癌HepG-2细胞增殖与转移的影响。方法 将miR-122模拟物（miR-122 mimics）及其阴性对照（mimics NC）分别转染至HepG-2细胞，实时荧光定量PCR（real-time flurescence quantitative PCR,RT-qPCR）测定转染后细胞中miR-122表达，试剂盒检测活性氧（reactive oxygen species, ROS）、二价铁离子(ferrous ion, Fe²⁺)、谷胱甘肽（glutathione, GSH）和丙二醛（malondialdehyde, MDA）水平，Western blotting检测铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase 4,GPX4）、溶质载体家族7成员11（solute carrier family 7 member 11,SLC7A11）及肿瘤蛋白p53（tumor protein p53,p53）的表达。将HepG2细胞分为对照组、mimics NC组（转染mimics NC）、miR-122 mimics组（转染miR-122 mimics）、mimics NC+铁死亡抑制剂Ferrostatin-1（Fer-1）组（转染mimics NC后加入10μmol/L Fer-1处理24 h）、miR-122 mimics+Fer-1组（转染miR-122 mimics后加入10μmol/L Fer-1处理24 h）,CCK-8法、Transwell小室实验、流式细胞术分别检测各处理组HepG2细胞活力、迁移与侵袭、细胞凋亡，试剂盒检测各处理组HepG2中ROS、Fe²⁺、GSH和MDA含量，Western blotting检测各处理组HepG2细胞中GPX4、SLC7A11及p53表达。结果 与对照组及mimics NC组比较，HepG-2细胞转染miR-122 mimics后，miR-122 mimics组中miR-122的表达水平明显升高（P<0.05）,细胞内ROS水平显著增加（P<0.05）,Fe²⁺浓度及MDA含量均呈显著上升（P<0.05）,而GSH含量明显下降（P<0.05）,同时，GPX4和SLC7A11蛋白的相对表达明显下调（P<0.05）,p53蛋白显著升高（P<0.05）,此外，该组细胞的存活率明显降低（P<0.05）,迁移和侵袭能力显著受抑（P<0.05）,凋亡比例明显升高（P<0.05）。与mimics NC+Eer-1组比较，miR-122 mimics+Fer-1组HepG-2细胞的存活率进一步下降（P<0.05）,迁移和侵袭能力明显降低（P<0.05）,凋亡水平显著增加（P<0.05）,同时，细胞内ROS及Fe²⁺浓度、MDA含量显著升高（P<0.05）,GSH含量进一步降低（P<0.05）,GPX4和SLC7A11蛋白相对表达也下降（P<0.05）,而p53蛋白表达明显上调（P<0.05）。结论 miR-122通过下调GPX4和SLC7A11蛋白表达、上调p53蛋白表达，促进肝癌HepG-2细胞铁死亡，从而抑制肝癌生长。

关键词

肝癌 / 微小RNA-122 / 生长 / 铁死亡