TRAP1调控线粒体自噬在胆管癌细胞化疗耐药中的作用及机制研究

摘要

目的 研究肿瘤坏死因子受体相关蛋白1（tumor necrosis factor receptor-associated protein 1,TRAP1）调控线粒体自噬在胆管癌细胞化疗耐药中的作用及机制。方法 培养胆管癌细胞株QBC939及5-氟尿嘧啶耐药的胆管癌细胞株QBC939-R,检测TRAP1的表达水平及5-氟尿嘧啶的半数抑制浓度(half inhibitory concentrationn,IC₅₀)。将QBC939-R细胞分为对照组、转染阴性对照（NC）siRNA的si-NC组、转染TRAP1 siRNA的si-TRAP1组，检测5-氟尿嘧啶IC₅₀、TRAP1、自噬相关基因5（autophagy associated gene 5,Atg5）、Atg7、微管相关蛋白1的轻链3（light chain 3,LC3）、PTEN诱导激酶1（PTEN induced kinase 1,PINK1）、Parkin、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（phosphorylated phosphatidylinositol 3-kinase, p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B,p-AKT）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（phosphorylated mammalian target of rapamycin, p-mTOR）的表达水平，全细胞及线粒体耗氧率（oxygen consumption rate, OCR）、三磷酸腺苷（adenosine triphosphate, ATP）水平。结果 QBC939-R细胞的5-氟尿嘧啶IC₅₀、TRAP1的mRNA和蛋白表达水平高于QBC939细胞（P<0.05）;si-TRAP1组QBC939-R细胞的5-氟尿嘧啶IC₅₀、TRAP1的mRNA和蛋白表达水平、全细胞OCR、线粒体OCR、ATP水平、Atg5、Atg7、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、PINK1、Parkin的蛋白表达水平低于对照组和si-NC组，p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的蛋白表达水平高于si-NC组和对照组（P<0.05）。结论 敲低TRAP1在5-氟尿嘧啶耐药的胆管癌细胞株中改善5-氟尿嘧啶耐药性、抑制线粒体氧化磷酸化及线粒体自噬，激活PI3K/AKT/mTOR通路是与上述作用相关的分子机制。

关键词

胆管癌 / 化疗耐药 / 肿瘤坏死因子受体相关蛋白1 / 线粒体自噬 / PI3K/AKT/mTOR通路

基金资助

二〇二三年度河南省医学科技攻关计划项目(LHGJ20230445)