Siglec-15通过Beclin-1/ATG-14通路调节肝细胞癌增殖迁移

摘要

目的 探究Siglec-15通过Beclin-1/ATG-14通路调节肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)细胞增殖迁移。方法 qRT-PCR、Western blotting检测正常肝脏细胞(L02)及3种HCC细胞株(SMMC-7721、BEL-7402、HEPG2)Siglec-15和Beclin-1的表达水平，检测Siglec-15敲低和过表达、Beclin-1过表达的转染效率，以及将HCC细胞系HEPG2分为：si-NC组、si-Siglec-15组、pcDNA组、Siglec-15组，si-NC组、si-Siglec-15组、si-Siglec-15+pcDNA组、si-Siglec-15+Beclin-1组，检测Siglec-15和Beclin-1及Beclin-1/ATG-14信号通路上自噬相关mRNA及蛋白的表达水平。使用GENE数据库预测Siglec-15和Beclin-1存在靶向关系，免疫共沉淀(co-immunoprecipitation, Co-IP)验证两者互作。将HCC细胞系HEPG2分为：si-NC组、si-Siglec-15组，si-NC组、si-Siglec-15组、si-Siglec-15+pcDNA组、si-Siglec-15+Beclin-1组，利用MTT、Transwell和细胞划痕实验检测转染后Siglec-15和Beclin-1对细胞增殖、迁移能力的影响。构建2组荷瘤小鼠模型，分别为pcDNA组、Siglec-15组，测量小鼠肿瘤体积变化、重量，利用qRT-PCR、Western blotting检测Siglec-15及Beclin-1/ATG-14信号通路上自噬相关mRNA及蛋白的表达水平。结果 发现Siglec-15在3种肝癌细胞系中的表达水平明显高于L02细胞(P<0.05),Beclin-1在3种肝癌细胞系中的表达水平明显低于L02细胞(P<0.05),选取HEPG2细胞株完成后续实验。HEPG2细胞株转染si-RNA及质粒成功。Co-IP结果显示Siglec-15与Beclin-1蛋白互作。敲低Siglec-15可抑制HCC细胞增殖、迁移。低表达Siglec-15可促进Beclin-1/ATG-14信号通路激活，高表达Siglec-15则相反。低表达Siglec-15可与过表达Beclin-1起协同作用，共同促进Beclin-1/ATG-14信号通路激活，同时加强抑制HCC细胞增殖、迁移。过表达Siglec-15通过抑制Beclin-1/ATG-14信号通路激活促进小鼠HCC生长。结论 Siglec-15在HCC细胞中高表达，Beclin-1在HCC细胞中低表达，两者存在互相作用、负向调控关系，体内、体外实验表明Siglec-15通过Beclin-1/ATG-14通路调节HCC增殖迁移。

关键词

Siglec-15 / Beclin-1/ATG-14 / 肝细胞癌 / 自噬 / 细胞增殖 / 细胞迁移