毛壳素通过活性氧依赖的内质网应激诱导肝癌细胞凋亡和自噬的研究

摘要

目的 探究毛壳素(Chaetocin)对人肝癌HepG2细胞凋亡与自噬的影响及其作用机制。方法 培养人肝癌HepG2细胞，分为对照组、N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)组、毛壳素组、NAC+毛壳素组。CCK-8法检测各组HepG2细胞存活率，流式细胞术检测各组HepG2细胞凋亡率，自噬双标腺病毒mRFP-GFP-LC3实验观察各组HepG2细胞自噬体与自噬溶酶体形成情况，Western blotting实验检测各组HepG2细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin 1蛋白表达水平，2,7-二氯荧光素二乙酸酯(2, 7-dichlorofluorescein diacetate, DCFH-DA)探针检测各组HepG2细胞中活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平，Western blotting实验检测各组HepG2细胞中葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein, CHOP)、磷酸化的蛋白激酶R样内质网激酶(phosphorylated protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase, p-PERK)和磷酸化的真核生物翻译起始因子2α(phosphorylated eukaryotic translation initiation factor 2α,p-eIF2α)蛋白表达水平。结果 与对照组比较，毛壳素组HepG2细胞存活率下降，凋亡率增加，细胞内自噬溶酶体和自噬体增多，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin 1蛋白相对表达量上调，ROS水平升高，GRP78、CHOP、p-PERK和p-eIF2α蛋白相对表达量也上调，差异均有统计学意义(P<0.05)。与毛壳素组比较，NAC+毛壳素组HepG2细胞存活率升高，凋亡率减少，细胞内自噬溶酶体和自噬体减少，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin 1蛋白相对表达量下调，同时，细胞中ROS水平降低，GRP78、CHOP、 p-PERK和p-eIF2α蛋白相对表达量也下调，差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 在肝癌细胞中毛壳素增加了ROS诱导的内质网应激反应，从而诱导细胞自噬与凋亡。

关键词

肝癌 / 毛壳素 / 活性氧 / 内质网应激 / 凋亡 / 自噬