抑制组蛋白去乙酰化酶6对溃疡性结肠炎作用及机制研究

摘要

目的 在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)体内和体外模型中探究抑制组蛋白去乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)对疾病活动、结肠炎症和组织损伤的缓解作用和机制研究。方法 体外细胞实验：使用HDAC6抑制剂Tubastatin A处理LPS诱导的NCM 460细胞炎症，Western blotting法检测各组细胞HDAC6、Occludin、ZO-1、STAT3和P-STAT3蛋白表达水平；ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10的表达水平；免疫荧光(immunofluorescence, IF)检测各组HDAC6、P-STAT3的表达。动物实验：对3%DSS诱导的UC小鼠腹腔注射HDAC6抑制剂Tubastatin A,通过系统比较各组小鼠疾病活动指数(disease activity index, DAI)和结肠组织损伤指数(tissue damage index, TDI)评分；Western blotting检测结肠中HDAC6、Occludin、STAT3和P-STAT3蛋白表达水平，以验证Tubastatin A对UC的缓解作用和介导的信号通路。结果 体外研究：与Control组细胞相比，LPS组细胞HDAC6、P-STAT3蛋白表达水平显著升高，Occludin和ZO-1蛋白表达显著下降(P均<0.05);ELISA显示细胞上清液TNF-α、IL-6、IL-1β表达显著升高，IL-10表达显著下降(P均<0.05);IF检测示HDAC6、P-STAT3分布范围和信号强度显著增加。使用Tubastatin A处理后细胞HDAC6、P-STAT3蛋白表达水平显著下降(均P<0.05)。动物实验：与Normal组小鼠相比，Saline组小鼠的DAI、TDI评分均显著升高，结肠中HDAC6、P-STAT3蛋白水平表达均显著增加，Occludin蛋白水平表达显著降低(P均<0.05)。而使用Tubastatin A处理后小鼠DAI、TDI评分均降低；HDAC6、P-STAT3蛋白水平表达显著减少，Occludin蛋白水平表达增加(P<0.05)。结论 HDAC6抑制剂Tubastatin A可通过阻断IL-6/STAT3信号通路，缓解UC,为UC的临床治疗和基础研究提供了新思路。

关键词

溃疡性结肠炎 / NCM460 / 组蛋白去乙酰化酶6 / IL-6/STAT3信号通路