DDX3X质核转移在内质网应激诱导的小鼠肝细胞凋亡中的作用研究

摘要

目的 探讨DEAD-box RNA解旋酶3X连锁(DEAD-box RNA helicase 3X-linked, DDX3X)质核转移对内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)诱导的小鼠肝细胞凋亡的影响及潜在分子机制。方法 动物实验以C57BL/6J小鼠为研究对象，细胞实验以野生型C57BL/6J小鼠原代肝细胞为研究对象，用衣霉素(tunicamycin, TM)诱导ERS。检测小鼠ALT、AST水平；采用HE染色法分析小鼠肝脏组织的病理学变化；通过CCK-8检测细胞活力；用LDH释放实验测定细胞凋亡情况；利用qRT-PCR和Western blotting检测内质网凋亡指标CHOP的基因及蛋白的表达情况。结果 在不同时间点给药TM建立小鼠肝损伤模型，在TM诱导的肝损伤期间，肝细胞内DDX3X逐渐由细胞质转移至细胞核。细胞核内DDX3X水平逐渐增加，并在TM刺激24 h后达到峰值；相反，细胞质中的DDX3X水平在TM刺激早期逐渐升高，但在TM刺激24 h后降低。然而，在抑制DDX3X从细胞质向细胞核移位后显著改善了小鼠肝损伤并减轻了肝细胞中的ERS,主要表现在小鼠肝功能水平显著降低，病理坏死区域和炎症细胞浸润面积减少；细胞存活率升高、LDH释放减少，以及内质网凋亡指标基因和蛋白水平的下降。结论 抑制DDX3X入核可显著改善ERS诱导的小鼠肝细胞凋亡，这为DDX3X在调控肝损伤的功能方面提供了理论支撑。

关键词

DDX3X / 质核转移 / 内质网应激 / 凋亡 / 肝损伤

基金资助

国家自然科学基金项目(81770611、82002243); 北京自然科学基金和北京市教委联合资助重点项目(KZ202010025035); 首都卫生发展科研专项重点攻关项目(首发2020-1-1151); 北京市科技计划“首都临床诊疗技术研究及示范应用”专项课题(Z191100006619096、Z191100006619097); 北京市医院管理中心“青苗”计划专项经费资助(QML20201702); 北京市医管局“登峰”人才计划(DFL20221503); 高层次公共卫生技术人才建设项目(学科带头人-02-13)