CPNE7对胃癌细胞恶性生物学功能的影响

摘要

目的 探究Ca²⁺依赖的膜结合蛋白7(Ca²⁺-dependent membrane-bound protein 7,CPNE7)对胃癌细胞恶性生物学功能的影响及可能参与的信号通路。方法 采用qRT-PCR和Western blotting检测在胃癌细胞AGS、HGC-27、MKN-45、SNU-1及胃黏膜细胞GSE-1中CPNE7 mRNA和蛋白的表达丰度，并挑选高表达CPNE7 mRNA的胃癌细胞株。采用慢病毒转染法敲低胃癌细胞株SNU-1中CPNE7的表达后，qRT-PCR验证敲减效率并建立稳定低表达CPNE7的胃癌细胞株（Sh-CPNE7）。CCK-8、EdU实验检测Sh-NC和Sh-CPNE7两组SNU-1细胞增殖能力，划痕实验和Transwell侵袭迁移实验检测Sh-NC和Sh-CPNE7组的侵袭、迁移能力。流式细胞学检测Sh-NC和Sh-CPNE7两组胃癌细胞凋亡能力。Western blotting检测Sh-NC和Sh-CPNE7两组胃癌细胞中细胞凋亡相关蛋白（Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9、Bax、Bcl-2）,上皮间质转化蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）及PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白的表达水平。结果 胃癌细胞SNU-1中CPNE7mRNA和蛋白显著高于GSE-1细胞株（P<0.05）,Sh-CPNE7组CPNE7mRNA的表达均低于Sh-NC组，且Sh-CPNE7-511组表达最低，差异有统计学意义（P<0.05）。与Sh-NC组相比，Sh-CPNE7组细胞增殖能力明显降低（P<0.05）。与Sh-NC组相比，Sh-CPNE7组细胞侵袭与迁移能力明显降低（P<0.05）。与Sh-NC相比，Sh-CPNE7组细胞凋亡率明显升高（P<0.05）。与Sh-NC组相比，Sh-CPNE7组细胞中Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9、Bax、E-cadherin表达明显升高（P<0.05）,Bcl-2、N-cadherin、Vimentin、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白明显降低（P<0.05）。结论 下调CPNE7表达可抑制胃癌细胞增殖、侵袭与迁移及上皮间质转化过程，促进胃癌细胞的凋亡，提示CPNE7基因可能成为胃癌的诊断标志物。

关键词

胃癌 / Ca²⁺依赖的膜结合蛋白7 / 细胞增殖 / 上皮间质转化 / PI3K/AKT/mTOR

基金资助

甘肃省自然科学基金项目(24JRRA1148)